主要功能和细节
检测类型:酶活性 检测方法:比色法 平台:缩微板阅读器 分析时间:3小时30分钟 样品类型:细胞培养提取物,组织
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
样品类型 细胞培养提取物,组织 -
检测类型 酶活性 -
检测时间 3小时 3000万 -
种属反应性 与反应: 小鼠、大鼠、奶牛、人类 -
产品概述 复合物I酶活性测定试剂盒(ab109721)是一种用于分析人、大鼠、小鼠和牛细胞和组织提取物中线粒体OXPHOS复合物I的酶活性的试剂盒。 复合物I的捕获抗体预先包被在微孔板孔中。 将样品添加到预先涂有特定捕获抗体的微孔板孔中。 靶标固定在微孔中后,通过NADH氧化为NAD+,同时还原染料,从而在OD=450 nm时增加吸光度,从而测定复合物I的活性。 通过在细胞外的孤立环境中分析酶的活性,并且不受任何其他变量的影响,可以了解酶功能状态的准确测量。
复合物I的活性由酶量和关键特异性调节残基的翻译后磷酸化控制。 细胞代谢控制这两个因素。 最终,细胞类型和生长条件将影响复合物I活性测量。
注:该活性测定测定了复合物I的黄递酶型活性。该活性不依赖于泛醌的存在,因此,在泛醌结合位点或附近结合的抑制剂(如鱼藤酮)不会抑制该测定。 然而,这里描述的活性测定和数量测定都受到酶组装缺陷的影响。
查看我们的 代谢分析指南 了解代谢产物、代谢酶、线粒体功能和氧化应激的检测,以及如何使用平板阅读器检测活细胞的代谢功能。
提供中文协议。 请参阅下面的协议部分。 -
说明 -
平台 缩微板阅读器
相关产品
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阳性对照
图片
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ab109721在方案中给出的推荐范围内测量人类培养细胞中的复合物I活性。 显示了在Hep2细胞中测量的复合物I活性的示例。 (注意,这些范围取决于线粒体制备质量)。 -
ab109721在方案中给出的推荐范围内测量人和大鼠培养细胞以及组织/组织线粒体样品中的复合物I活性。 显示了在不同大鼠组织线粒体样品中测量的复合体I活性的实例。 (注意,这些范围取决于线粒体制备质量)。 -
显示了在不同大鼠组织线粒体样品中测量的复合物I活性的示例。 (注意,这些范围取决于线粒体制备质量)。 -
感染后大鼠心脏组织中的米氏分泌物 S公司 . 肺炎, 或给予PBS假对照,进行复杂I-V活动的测量。 复合物I用ab109721(左上)测量,复合物II+III用 澳大利亚银行109905 (右上角),使用 约109911 (左下)和复合体V使用 澳大利亚银行109714 (右下角)。 将新分离的线粒体颗粒重新悬浮在补充了试剂盒中10%清洁剂的PBS中。 估计这些线粒体裂解物的蛋白质浓度,每次反应使用25μg(对于复合物I、IV和V)或100μg(针对复合物II+III)线粒体蛋白质。 分光光度法测量酶活性,一式三份,表示为每毫克蛋白质每分钟吸光度的变化。 -
(A) ab10972年 1用于测量正常和Rho0人成纤维细胞全细胞裂解液中复合物I的活性,浓度为1mg/mL。Rho0细胞是线粒体DNA被去除的细胞,因此不表达必需的复合物I蛋白。 如图所示,rho0细胞没有/几乎没有复合I活性。 (B) 在类似的分析中,大鼠心肌细胞在±40µM氯霉素(CAM)中培养5天,以抑制线粒体蛋白质合成、复合物I组装,因此在0.5 mg/mL全细胞裂解液中加载的样品中活性大大降低。 -
复合物Ⅰ酶活性微孔板检测试剂盒(ab109721)的原理
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (234)
朱毅 等。 miR-340-5p通过靶向Mcl-1介导糖尿病诱导的心脏功能障碍中的心肌细胞氧化应激。 氧化介质细胞Longev 2022:3182931 (2022). 公共医学:35126811 雷M 等。 长非编码RNA TUG1海绵microRNA-9,通过SIRT1上调保护足细胞免受高糖诱导的凋亡和线粒体功能障碍。 实验治疗学 23:236(2022)。 公共医学:35222713 金·M 等。 帕金对内毒素血症期间心肌线粒体相关膜和心肌病的调节作用的评价。 前细胞发育生物学 10:796061 (2022). 公共医学:35265609 麦克罗伊GS 等。 线粒体复合物I亚单位Ndufs2表达减少不会影响小鼠的健康寿命。 科学代表 12:5196 (2022). 公共医学:35338200 Franchina总经理 等。 谷胱甘肽依赖性氧化还原平衡是卵泡和边缘区B细胞不同代谢特性的特征。 国家公社 13:1789(2022)。 公共医学:35379825