主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[E87]抗Caspase-3 适用于:ICC/IF、Flow Cyt(Intra)、WB、IHC-P、IP 敲除已验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [E87]至半胱氨酸蛋白酶-3 -
宿主 兔子 -
特异性 该抗体对人Caspase-3的前体和p17裂解形式具有特异性。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 不与反应: 鼠标 -
免疫原 人Caspase-3 aa 50-150内的合成肽。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: 第42574页 -
阳性对照 WB:Jurkat全细胞裂解物( ab7899型 ); 野生型HAP1全细胞裂解物; Ramos和HEK-293细胞裂解物。 IHC-P:人类扁桃体和宫颈癌组织。 ICC/IF:Jurkat细胞和野生型HAP1细胞。 流式细胞周期(内部):HeLa和Ramos细胞。 IP:HeLa全细胞裂解物。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油、0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 E87型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
检测试剂盒 -
兼容的辅助设备 -
共轭试剂盒 -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
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应用
靶标
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功能 参与负责凋亡执行的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的激活级联。 在细胞凋亡开始时,它以蛋白质水解的方式切割聚ADP-核糖聚合酶(PARP)- -Gly-217'键。 切割并激活基本螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链结构域和膜连接结构域之间的固醇调节元件结合蛋白(SREBP)。 劈开并激活半胱天冬酶-6、-7和-9。 参与亨廷顿蛋白的分裂。 -
组织特异性 在肺、脾、心、肝和肾中高表达。 大脑和骨骼肌中含量适中,睾丸中含量较低。 在许多细胞系中也发现,在免疫系统的细胞中表达最高。 -
序列相似性 属于肽酶C14A家族。 -
翻译后修饰 颗粒酶B、caspase-6、caspase8和caspase-10裂解产生两个活性亚基。 前肽的额外加工可能是由于活化蛋白酶的自催化活性。 caspase-7蛋白酶小亚基和caspase-3大亚基之间也存在活性异二聚体,反之亦然。 在未刺激的人类细胞系中,S-亚硝酰化在其催化位点半胱氨酸上,在Fas凋亡途径激活时反硝化,与细胞内caspase活性增加相关。 因此,Fas不仅通过诱导caspase酶原裂解为其活性亚单位,而且通过刺激其活性位点硫醇的反硝化作用来激活caspase-3。 -
细胞定位 细胞质。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 A830040C14Rik抗体 载脂蛋白抗体 CASP 3抗体
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图片
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所有车道: 抗天冬氨酸酶-3抗体[E87](ab32351),1/5000稀释 车道1: DMSO对照野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: Staurosporine处理的野生型HAP1全细胞裂解物 3号车道: DMSO控制CASP3敲除HAP1全细胞裂解物 车道4: Staurosporine处理的CASP3敲除HAP1全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 32千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在31 kDa处观察到ab32351。 红色-装载控制, 2007年12月13日 ,在130 kDa下观察到。 ab32351在野生型HAP1细胞中识别Caspase 3,因为在HAP1 Staurosporine处理的(CASP3)敲除细胞中信号在预期MW处丢失。 在野生型和敲除型细胞中观察到额外的交叉反应带。 野生型和HAP1 Staurosporine Treated(CASP3)敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab32351和 2007年12月13日 (小鼠抗Vinculin负荷控制)分别在4°C、1/5000稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
ab32351染色野生型Hap1细胞中的Caspase-3(顶面板)和CASP3敲除Hap1的细胞(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用1μg/ml浓度的ab32351培养细胞 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
用纯化的ab32351在1/100工作稀释度下对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学染色。 使用的二级抗体是HRP山羊抗兔IgG H&L( ab97051型 )1/500。 用苏木精对样品进行反染色。 使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。 使用PBS代替一级抗体作为阴性对照,如插图所示。 -
所有车道: 抗天冬氨酸酶-3抗体[E87](ab32351),1/5000稀释(纯化) 车道1: 未经处理的Jurkat(外周血T细胞白血病细胞系)细胞裂解物 车道2: 用staurosporine治疗Jurkat 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: HRP山羊抗兔IgG(H+L)(1/1000稀释) 预测的带宽大小: 32千帕 观察到的频带大小: 17.35千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻塞缓冲区:5%NFDM/TBST 稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
用纯化的ab32351在1/500工作稀释度下对Jurkat(外周血T细胞白血病细胞系)细胞进行免疫荧光染色,并用DAPI进行反染色。 次要抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔( 约150077 ),稀释度为1/1000。 约7291 是一种小鼠抗微管蛋白抗体(1/1000),用于染色微管蛋白和 ab150120型 (Alexa Fluor公司 ® 594山羊抗鼠软件,1/1000),如右上角面板所示。 细胞固定在4%PFA中,并使用0.1%Triton X 100进行渗透。 阴性对照显示在底部中间和右侧面板中-对于阴性对照1,纯化的ab32351以1/500的稀释度使用,然后使用Alexa Fluor ® 594羊抗鼠抗体( ab150120型 )稀释度为1/500。 对于阴性对照2, 约7291 (小鼠抗微管蛋白)以1/500的稀释度使用,然后使用Alexa Fluor ® 488羊抗兔抗体( 约150077 )稀释度为1/400。 -
未经纯化的ab32351,1/25稀释,用免疫组织化学方法对石蜡包埋的人宫颈癌组织中的Capase-3进行染色。 在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。 -
所有车道: 抗天冬氨酸酶-3抗体[E87](ab32351),1/5000稀释(纯化) 车道1: Ramos(人Burkitt淋巴瘤细胞系)细胞裂解物 车道2: HEK-293(人胚胎肾上皮细胞系)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: HRP山羊抗兔IgG(H+L)(1/1000稀释) 预测的带宽大小: 32千帕 观察到的频带大小: 35千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻塞缓冲区:5%NFDM/TBST 稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
ab32351(纯化)在1/50免疫沉淀Cullin 1中加入10μg HeLa(子宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解液(Lanes 1和Lanes 2,在35kDa下观察)。 通道3-PBS。用于western blotting,用于IP检测试剂(HRP)的VeriBlot( 阿布131366 )用于检测(1/1500)。 封闭缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST稀释缓冲液和密度:5%NFDM/TBST -
叠加直方图显示Ramos(人伯基特淋巴瘤细胞系)细胞固定在4%PFA中,并用稀释度为1/180的纯化ab32351染色(红线)。 使用的二级抗体是FITC山羊抗兔抗体,稀释率为1/500。 兔单克隆IgG用作同型对照(黑线),在没有一级和二级抗体的情况下培养的细胞用作阴性对照(蓝线)。 -
用未纯化抗体进行。 通道1=半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白(活性)( 约52314 )20 ng.通道2=半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9蛋白(活性)( ab52203型 )20 ng.Lane 3=用载体处理的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)细胞提取物( 约136806 )20 ug.Lane 4=用staurosporine处理的HeLa细胞提取物( 约136806 )20 ug.SDS PAGE在还原条件下进行(100 mM DTT样品在50°C下加热)。 主要:通道1-4:抗半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3抗体(ab32351),1:1000稀释。 次要:1-4道:山羊抗兔IgG(H&L)-HRP,1:10000。 显影:ECL曝光10分钟。 封闭:在5%牛奶+PBS中4℃过夜。一级抗体:在5%奶+PBS内2小时。二级抗体:5%牛奶+PBS内2个小时。预测带大小:32 kDa和17 kDa。 观察到的频带大小:32 kDa和17 kDa。 -
重叠直方图显示HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞被未纯化的ab32351(红线)染色。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab32351,1/1000稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150081 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)( 约172730 ,0.1微克/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (299)
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