溴脱氧尿苷抗体 抗体 [BU1/75(ICR1)]-增殖标记(ab6326)
主要功能和细节
大鼠单克隆[BU1/75(ICR1)]到BrdU-增殖标记 适用于:ICC/IF、流式细胞周期(内部)、IHC-P 反应:物种独立 同位素:IgG2a
相关共轭物和制剂
(美国)
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产品名称 -
日本 大鼠单克隆抗体 [BU1/75(ICR1)]至BrdU-增殖标记 -
宿主 老鼠 -
特异性 该抗体与单链DNA中的BrdU反应,BrdU附着在蛋白载体或游离BrdU上。 它检测S期的有核细胞,这些细胞的DNA中含有BrdU。 也与氯脱氧尿苷反应,但染色减少。 抗体不与胸苷反应。 文献报道,该抗体克隆与Edu发生交叉反应(PMID:23272138),一些客户报告称其与IdU发生交叉反应。 -
试验 -
种属反应性 与反应: 物种无关 -
免疫原 该抗体的免疫原细节尚不清楚。 -
阳性对照 ICC/IF:HeLa细胞; 流式细胞仪(Intra):HeLa细胞; IHC-P:大鼠小肠组织。
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常规说明 协议建议 : 这种抗体可以识别单链DNA,因此需要先解开DNA。 这可以用DNAse实现,尽管它并没有给出最佳结果。 根据检测结果,用2M HCL进行酸变性或热变性最为成功。 请注意,此步骤在使用此抗体的任何分析中都是至关重要的,并且是应该修改以优化结果的区域。 详细的BrdU染色协议可在Protocols(协议)选项卡中找到,或点击此处 链接 . 经BrdU(福尔马林固定、石蜡包埋肠段)治疗的小鼠的未染色阳性对照玻片可用作BrdU对照玻片 ab129956型 . 这种单克隆抗体由Abcam独家制造。 AF488共轭物可用作 约220074 AF647共轭物可用作 约220075 有关其他可用的缀合物,请参阅“关联产品”选项卡。 如果您需要在特定的缓冲液配方或特定的结合物中使用此抗体进行实验,请联系 orders@abcam.com 或者您可以找到更多信息 在这里 . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买之前向我们发送查询和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C或-80°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS,6.97%L-精氨酸 一些批次含有6.97%的L-精氨酸作为稳定剂。 有关批次特定缓冲区的信息,请联系我们的科学支持团队。 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质G纯化 -
克隆 单克隆 -
协调 BU1/75(ICR1) -
同种型 IgG2a -
轻链类型 卡帕 -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
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美国
靶标
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相关性 DNA中溴脱氧尿苷(BrdU)的免疫细胞化学检测是研究正常细胞和肿瘤细胞的细胞动力学的有力工具。 用胸腺嘧啶类似物BrdU在体外或体内标记肿瘤细胞,然后用特异性抗BrdU单克隆抗体检测合并的BrdU,是一种准确而全面的定量DNA合成程度的方法。 将BrdU并入S期细胞新合成的DNA中,可以估计S期细胞的比例。 通过双变量BrdU/DNA流式细胞术分析,还可以获得动态增殖信息,如S期转运率和潜在加倍时间。 -
细胞定位 核能 -
别名 溴脱氧尿苷抗体 BUdr抗体
图片
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ab6326染色Hela细胞中的BrdU。 未处理和BrdU处理的细胞(10uM,24小时)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后在室温下用2M HCL在0.1%PBS-Tween中酸水解30分钟,以使DNA变性。 然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS Tween中封闭1小时。 然后在4°C下用1μg/ml的ab6326培养细胞过夜 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 ab150165型 大鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 小鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)采集图像,显示单个共焦切片。 -
点图显示用ab6326染色的BrdU处理的HeLa细胞。细胞在收获前用10µM BrdU孵育30分钟,在1x PBS中洗涤两次,并在70%乙醇(4°C,滴加)中在冰上固定至少30分钟。 固定后,用2M HCl在22℃下对颗粒进行酸变性30分钟,然后用硼酸盐缓冲液(0.1M,pH8.5)中和。 样品在1x PBS/10%正常山羊血清中洗涤和培养,以阻断抗体(ab6326,1µg/1x10)之后的非特异性蛋白质相互作用 6 电池)在22°C下保持30分钟。 使用的二级抗体是 预先吸附的山羊抗大鼠IgG H&L(Alexa Fluor®488)(ab150165) 在22ºC下,1/2000稀释30分钟。 在数据采集前20分钟向细胞中添加7-AAD。 使用带有530/30和685/35带通滤波器的50 mW蓝色激光器(488nm)采集了5000多个事件。 -
共聚焦免疫荧光切片(约0.3μm厚)显示不同因子在感染Ad5 wt的HEK 293细胞中的定位。BrdU(ab6326,品红色)和L1 52/55 kDa(绿色)的双重标记。 虚线矩形表示底行中放大倍数较高的区域。 棒材:3μm。 将生长在盖玻片中的单层HEK293细胞感染Ad5 wt。通过在4°C下培养细胞30 min,然后在37°C下孵育30 min来同步感染。 然后,去除接种物并添加培养基。 对于BrdU标记,在37°C下18小时后,用含有25μg/ml BrdU(5-溴-2'-脱氧尿苷)的培养基改变培养基,然后在25 hpi下再次改变。 在37°C下用BrdU进行培养。 36 hpi后,去除培养基,并在10 min内将PBS中的4%多聚甲醛添加到细胞中。用PBS冲洗3次后,用0.5%皂苷和10%FBS在PBS中混合培养盖玻璃10 min。用0.5%皂甙和2%FBS中的一级抗体在45 min内培养样品。再冲洗三次后, 在黑暗中用稀释在0.5%皂苷和2%FBS中的二级抗体进行孵育。 用PBS进行最后冲洗后,将盖玻片安装在玻璃载玻片上。 在观察样品之前,让防褪色试剂干燥过夜。 所有培养均在室温下进行。 使用共焦多光谱徕卡TCS SP5系统拍摄图像。 -
ab6326染色HeLa细胞的ICC/IF图像,BrdU处理的细胞(左图)和正常细胞(右图)。 细胞被100%甲醇固定(5分钟),然后在室温下用2M HCL在0.1%PBS-Tween中酸水解30分钟,以使DNA变性。 然后将其在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1h,以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 然后将细胞与抗体(ab6326,10µg/ml)在+4°C下孵育过夜。 二级抗体(绿色)为 山羊抗狂犬病IgG H&L(DyLight®488)预吸附床(ab98420) 以1/250的稀释度使用1h。 Alexa Fluor公司 ® 594 WGA用于标记1/200稀释1h的质膜(红色)。 采用DAPI对浓度为1.43µM的细胞核(蓝色)进行染色。 在经BrdU处理的细胞中可以看到阳性染色,但在正常细胞中不能看到,这表明了BrdU的特异性。 -
福尔马林固定石蜡包埋大鼠小肠BrdU组织切片中ab6326染色的IHC图像。 使用压力锅热介导抗原回收和柠檬酸钠缓冲液(pH6)预处理30分钟,并在+4°C和ab6326以3 ug/ml孵育过夜。使用山羊抗鼠生物素化二级抗体检测初级抗体,并使用HRP结合ABC系统进行可视化。 切片用苏木精复染并用DPX固定。 对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),用户应优化可变参数,如抗原检索条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。 -
用ICC对大鼠脑组织培养细胞进行ab6326染色。 样品固定在PFA中,并在1M HCl中渗透,然后用5%的血清在25°C下封闭1小时。 将初级抗体稀释1/500,并与样品在25°C下孵育16小时。 使用稀释1/200的生物素化兔抗鼠IgG抗体作为次要抗体。 -
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用流式细胞仪ab6326染色HeLa细胞中的BrdU。 在用1X胰蛋白酶-EDTA收获细胞之前,用10µM BrdU培养细胞30分钟,在含有1%BSA的PBS中洗涤两次,并在70%乙醇(添加滴状物)中在冰上固定至少30分钟。 一旦固定,在室温下用HCl/Triton X-100对颗粒进行酸变性30分钟,然后用四硼酸钠中和。 将颗粒细胞重新悬浮在吐温/牛血清白蛋白/PBS中,然后向其添加一级抗体(0.1µg在0.5%吐温20(v/v)中加1%牛血清白蛋白在PBSA中),并在室温下培养30分钟。 以1/500的比例使用次级Alexa Fluor®488-共轭山羊抗鼠IgG(H+L),并在室温下黑暗中孵育30分钟。再次造粒细胞,并将其重新悬浮在含有5µg/mL碘化丙啶的PBS中。
选通策略: 基于正向和侧向散射,将细胞选通到用于分析的区域。 这是通过将一个大圆应用于 -
用免疫组织化学方法(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)对小鼠肺组织切片中的BrdU进行ab6326染色。 组织样品用柠檬酸缓冲液热介导40min。 用10%驴血清在22°C下封闭切片1小时。 样品在4°C下与一级抗体(1/200在10%驴血清-PBS 0.2%Triton中)孵育16小时。 Cy™3 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG(H+L)(1/400)用作二级抗体。 注射萘后第5天拍摄的小鼠肺部终末细支气管的典型共焦图像。 颜色标签CC10(红色)、FoxJ1(绿色)、BrdU(黄色)和核DNA(蓝色)。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文 (1734)
Adpaikar AA公司 等。 神经损伤后,上皮可塑性增强了特定味觉受体细胞的再生。 实验-分子-药物 55:171-182 (2023). 公共医学:36631663 王勇军 等。 精氨酸缺乏通过抑制组蛋白H4翻译和促进PCNA泛素化,诱导复制应激并赋予基因毒性抵抗。 单元格代表 42:112296 (2023). 公共医学:36961817 朱X 等。 TRIM21通过优先靶向CLASPIN以实现K63连锁泛素化来抑制CHK1的激活。 核酸研究 50:1517-1530 (2022). 公共医学:35048968 Jin Z公司 等。 骨骼肌卫星细胞在β-连环蛋白介导的骨质疏松性骨折修复中的作用。 J肌肉恶病质 13:1403-1417 (2022). 公共医学:35178895 刘Z 等。 Sec13通过自分泌多肽信号促进少突胶质细胞分化和髓鞘修复。 临床研究杂志 132:不适用(2022年)。 公共医学:35143418