主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 β-连环蛋白-ChIP级兔单克隆抗体[E247] 适用对象:IHC-P、WB、ICC/IF、IP、ChIP 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关偶联物和制剂
(美国)
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [E247]至β-连环蛋白-ChIP级 -
宿主 兔子 -
特异性 这种抗体不适用于小鼠和大鼠的ICC测试。 我们的室内测试表明,在western blot中,该抗体在Raw264.7细胞系中不起作用。 我们有另一种抗体 约68183 检测Raw264.7下游表达的弱带。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 预测: 绵羊、仓鼠、奶牛、猕猴、非洲绿猴 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:A431、HeLa、野生型HAP1、HCT 116和野生型MCF7细胞裂解物。 ICC/IF:A431和野生型HAP1细胞。 SW480和SK-N-SH电池。 IHC-P:人肺腺癌、肾腺癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、甲状腺乳头状癌、大鼠肝和胰腺、小鼠肝和胰腺; IP:A431全细胞裂解液和小鼠脑裂解液。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 E247型 -
同种型 IgG抗体 -
研究领域
产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
靶标
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功能 典型Wnt信号通路的关键下游成分。 在缺乏Wnt的情况下,与AXIN1、AXIN2、APC、CSNK1A1和GSK3B形成复合物,促进N末端Ser和Thr残基的磷酸化,并通过BTRC泛素化CTNNB1,随后被蛋白酶体降解。 在Wnt配体的存在下,CTNNB1不是泛素化的,而是聚集在细胞核中,在细胞核中充当TCF/LEF家族转录因子的辅激活剂,从而激活Wnt应答基因。 参与细胞粘附的调节。 大多数β-catenin定位于细胞膜,是E-cadherin/catenin粘附复合物的一部分,拟将钙粘蛋白偶联到肌动蛋白细胞骨架。 -
组织特异性 表达于几种毛囊细胞类型:基底和外周基质细胞,以及内外根鞘细胞。 以冒号表示。 -
疾病相关 CTNNB1缺陷与结直肠癌(CRC)相关[MIM:114500]。 注:CTNNB1的激活突变具有致癌活性,导致肿瘤发展。 体细胞突变存在于各种肿瘤类型中,包括结肠癌、卵巢癌和前列腺癌、肝母细胞瘤(HB)、肝细胞癌(HCC)。 乙肝是一种恶性胚胎性肿瘤,主要影响生命最初三年的幼儿。 CTNNB1缺陷是毛瘤(PTR)的原因[MIM:132600]; 常见的良性皮肤肿瘤。 CTNNB1缺陷是髓母细胞瘤(MDB)的原因[MIM:155255]。 MDB是一种恶性的、侵袭性的小脑胚胎性肿瘤,在儿童中最常见。 CTNNB1缺陷是卵巢癌(OC)易感性的一个原因[MIM:167000]。 卵巢癌起源于卵巢组织的常见恶性肿瘤。 尽管已经描述了许多卵巢肿瘤的组织学类型,但上皮性卵巢癌是最常见的形式。卵巢癌通常无症状,即使是晚期疾病,其公认的症状和体征也是模糊的。 因此,大多数患者被诊断患有晚期疾病。 注=涉及CTNNB1的染色体畸变见于涎腺多形性腺瘤,这是涎腺最常见的良性上皮肿瘤。 用PLAG1易位t(3;8)(p21;q12)。 -
序列相似性 属于β-连环蛋白家族。 包含12个ARM重复。 -
翻译后修饰 GSK3B的磷酸化需要另一激酶预先磷酸化Ser-45。 然后磷酸化从Thr-41进行到Ser-37和Ser-33。 EGF刺激酪氨酸磷酸化。 Tyr-654上的磷酸化降低CDH1结合并增强TBP结合。 当GSK3B磷酸化时,SCF(BTRC)E3连接酶复合物泛素化,导致其降解。 被包含UBE2D1、SIAH1、CACYBP/SIP、SKP1、APC和TBL1X的E3泛素连接酶复合物泛素化,导致其随后的蛋白酶体降解。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 细胞质>细胞骨架。 细胞连接>粘附连接。 细胞连接。 细胞膜。 当其不稳定(高水平磷酸化)或与CDH1结合时为细胞质。 当其稳定时转移到细胞核(低水平磷酸化)。 与GLIS2和MUC1的相互作用促进核移位。 与EMD的相互作用抑制核定位。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 539003 奶牛 Entrez基因: 1499 人类 Entrez基因: 12387 鼠标 Entrez基因: 84353 老鼠 Entrez基因: 绵羊 Omim公司: 116806 人类 瑞士保护银行: Q0VCX4型 奶牛 瑞士保护银行: 第35222页 人类
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别名 b-连环蛋白抗体 β连环蛋白抗体 β-连环蛋白抗体
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图片
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ab32572染色HCT116细胞球体中的ß-catenin。 细胞用4%甲醛固定(10分钟),用0.5%Triton X-100渗透1h,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中隔夜室温下封闭。 然后在室温下用ab32572以2µg/ml和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]以2µg/ml的速度与α-管蛋白结合。DAPI用作核复染(以蓝色显示)。 作为次级抗体 约150081 山羊抗兔(Alexa Fluor ® 488)(以绿色显示)和 ab150120型 山羊抗鼠(Alexa Fluor ® 594)(以洋红色显示),在室温下培养过夜。 所有渗透、封闭和抗体培养步骤均使用旋转振动筛进行。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 抗体ab32572也可以使用100%甲醇(5分钟)。 -
所有车道: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),稀释1/5000 车道1: 野生型MCF7细胞裂解物 车道2: CTNNB1敲除MCF7细胞裂解物 车道3: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 85/90千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级染色,稀释1/5000,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab32572被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型MCF7细胞裂解液中在85/90 kDa处观察到一条带,在CTNNB1敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约286762 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1敲除MCF7细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
免疫组织化学分析中使用ab32572对抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级的组织芯片进行染色。 本表详细概述了每种测试样品类型的阳性(勾号)和阴性(交叉标记)染色。 将切片与ab32572在室温下孵育30分钟,然后使用即用兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟。 -
所有车道: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),稀释1/5000 车道1: 野生型HepG2细胞裂解物 车道2: CTNNB1敲除HepG2细胞裂解物 车道3: HeLa细胞裂解物 车道4: A431细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 85千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级染色,稀释1/5000,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab32572被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HepG2细胞裂解液中在85 kDa处观察到一条带,在CTNNB1敲除细胞系中未观察到该大小的信号( ab277911型 ). 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1敲除HepG2细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )以1/2000稀释。 -
ab32572在CTNNB1(β-连环蛋白)野生型HAP1细胞(上图)和CTNNB1基因敲除HAP1的细胞(下图)中染色。 细胞用100%甲醇固定(5min),用0.1%Triton X-100透化5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1h。 然后用ab32572以1/250的稀释度孵育细胞,并 约195889年 以1/250的稀释度(以伪红色显示)在+4°C下过夜,然后在室温下用 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附(ab150081)二级抗体 浓度为2μg/ml(显示为绿色)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
车道4: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( 邮编:216773 )稀释1/5000 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: CTNNB1(ß-catenin)敲除HAP1全细胞裂解物 车道3: HeLa全细胞裂解物 车道4: A431全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 86千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在90 kDa下观察到ab32572。 红色-装载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 在野生型HAP1细胞中,ab32572与CTNNB1(β-catenin)特异性反应。 使用CTNNB1(β-catenin)敲除样品时未观察到条带。 对野生型和CTNNB1(β-catenin)敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab32572和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C、1/5000稀释度和1/10000稀释度下培养过夜。 印迹是用 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附剂(ab216773) 和 山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床(ab216776) 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
用ab32572在1/500稀释度下对人宫颈癌组织进行β-连环蛋白染色的免疫组织化学分析。 用柠檬酸缓冲液(pH 6)进行热介导抗原回收 -
根据Abcam Dual-X-ChIP协议*,从HCT 116细胞制备染色质。 细胞用1.5 mM EGS固定30分钟,然后用甲醛固定10分钟。 用25µg染色质、5µg ab32572(红色)或5µg兔正常IgG进行ChIP 约172730 (灰色)和20µl蛋白质A/G sepharose珠。 免疫沉淀DNA通过实时PCR定量(Taqman方法用于活性和非活性位点,Sybr green方法用于异色位点) 引物和探针来自纸张PMID:28625518 * http://www.abcam.com/resources?keywords=X%20ChIP%20协议 -
所有车道: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),1/500稀释 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: CTNNB1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 86千帕 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在86 kDa下观察到ab32572。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab32572与野生型HeLa细胞中的β-连环蛋白反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255352号 (敲除细胞裂解物 约263756 )已使用。 对野生型HeLa和CTNNB1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab32572和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),稀释1/5000 车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物 车道2: CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 95千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级染色,稀释1/5000,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷对照染色,以红色显示。在Western blot中,ab32572被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解液中观察到95kDa的条带,在CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约273712 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物 ab275247号 ). 在CRISPR-Cas9编辑的低于95 kDa的裂解物通道中观察到的条带可能代表β-连环蛋白的截断形式。 这一点尚未得到进一步研究,基因产物的功能特性也尚未确定。 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )以1/2000稀释。 -
在2.0µg/ml的A431(人类表皮样癌上皮细胞)裂解液上测试不同批次的ab32572。每条车道上装载15µg裂解液。 在92 kDa下观察到的谱带。 -
抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),1/10000稀释+A431(人类表皮样癌上皮细胞)全细胞裂解物,15µg 次要 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 92千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:180秒 -
用ab32572在1/500稀释度下对人乳头状癌组织进行β-连环蛋白染色的免疫组织化学分析。 用柠檬酸缓冲液(pH 6)进行热介导抗原回收。 -
β-连环蛋白从0.35 mg A431(人表皮样癌上皮细胞)全细胞裂解液中免疫沉淀,ab32572以1/50稀释(0.35 mg裂解液中2μg)。 使用ab32572 1/500稀释液(2μg/ml)对免疫沉淀进行Western blot。 IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 )以1/1000稀释度作为二级抗体。 通道1:A431(人表皮样癌上皮细胞)全细胞裂解液10μg 通道2:ab32572 IP in A431全细胞裂解液 通道3:兔单克隆IgG( 约172730 )而不是A431全细胞裂解液中的ab32572。 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:3秒 车道1: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),稀释度为1/500(2µg/ml) 车道1: A431(人表皮样癌上皮细胞)全细胞裂解液(10µg) 车道2: ab32572 IP in A431全细胞裂解液 车道3: 兔单克隆IgG( 约172730 )而不是A431全细胞裂解液中的ab32572 次要 车道1: IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 )稀释1/1000 观察到的频带大小: 90千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
用ab32572在1/500稀释度下对人肺腺癌组织进行β-连环蛋白染色的免疫组织化学分析。 用柠檬酸缓冲液(pH 6)进行热介导抗原回收。 -
ab32572染色BIO处理的SW480(人大肠腺癌细胞系)细胞中的β-连环蛋白( 公元120891年 )如文献所述,β-连环蛋白表达增加与BIO浓度增加相关。 将细胞在含有不同浓度的 公元120891年 (BIO)在DMSO中,用4%甲醛在室温下固定10分钟,用含有10%山羊血清、0.3M甘氨酸、1%牛血清和0.1%吐温的PBS在室温下封闭2小时。 用ab32572(1/200)稀释液对处理过的细胞进行染色,在4°C的含1%BSA和0.1%吐温的PBS中过夜。 A类 山羊抗狂犬病IgG H&L(DyLight®488)预吸附(ab96899)二级抗体 以1/250稀释液作为二级抗体。 细胞核用DAPI复染,显示为蓝色。 -
使用ab32572和抗肌动蛋白抗体以1/5000稀释度对WT和基因破坏细胞的总细胞提取物进行WB分析。 指出了β-连环蛋白、截短的β-连环素和肌动蛋白带的位置和全长。 对于野生型细胞和基因断裂克隆,每条车道上施用5µg TP。 细胞在含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂片的RIPA缓冲液中溶解。 通过离心法清除细胞裂解物,并在每条车道上装载5–30µg SDS样品缓冲液中总蛋白的蛋白质浓度并分离。 二级抗体是以1:5000稀释度使用的驴抗兔IgG-HRP。 -
ab32572在人肾癌组织中呈阳性染色。 用ab32572在1/500稀释度下对人肾癌组织进行β-连环蛋白染色的免疫组织化学分析。 用柠檬酸缓冲液(pH 6)进行热介导抗原回收。 -
奥氮平对SK-N-SH(人神经母细胞瘤细胞系)细胞中β-连环蛋白的ab32572染色( 约120736 )国际商会/国际单项体育联合会。 如文献所述,β-连环蛋白表达增加与奥氮平浓度增加相关。 细胞在37°C的培养基中培养24小时,培养基中含有不同浓度的 约120736 (奥氮平)置于二甲基亚砜中,室温下用4%甲醛固定10分钟,室温下使用含10%山羊血清、0.3M甘氨酸、1%牛血清白蛋白和0.1%吐温的PBS封闭2小时。 用ab32572(1/200稀释)对处理过的细胞进行染色,在4°C的含1%BSA和0.1%吐温的PBS中过夜。 A类 山羊抗狂犬病IgG H&L(DyLight®488)预吸附(ab96899)二级抗体 以1/250稀释液作为二级抗体。 细胞核用DAPI复染,显示为蓝色。 -
抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP等级(ab32572),1/5000稀释+U-2 OS(人骨肉瘤上皮细胞系)全细胞裂解液 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 90千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? ab32572染色的U-2 OS(人骨肉瘤上皮细胞系)细胞全细胞裂解物的Western blot图像。 用5%的牛奶在21°C下封闭凝胶1小时。 将初级抗体稀释1/5000,并在4°C下孵育12小时。 以HRP结合猪抗兔抗体作为次级抗体。 -
β-连环蛋白在HCT(肝癌组织)和PLT(癌旁肝组织)中的表达水平不同。 将HCT、PLT石蜡包埋并切割成5μm厚的切片,用于苏木精-伊红和免疫组织化学(IHC)分析。 ab32572以1:400的稀释度使用。 第二种抗体是生物素化IgG,在37°C下孵育40分钟。 最后,用3,3-二氨基联苯胺溶液对组织切片进行可视化,并用苏木精进行复染。 用磷酸盐缓冲盐水替代一级抗体作为IHC的对照。 在HCT(E-H)和PLT(M-P)中分别检测到具有阴性、弱、中度和强染色活性的β-连环蛋白。 如上所示的E部分,有关完整图像,请参阅原始纸张。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (944)
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