概述
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产品名称 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 HCT116型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子3中14 bp缺失和7 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
说明 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 重构后,短期储存在-20°C下,长期储存在-80°C下。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经测试应用
性能
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存放说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab277291-人CTNNB1敲除HCT116细胞裂解物 1 x 100微克 ab277289-人类野生型HCT116细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性
靶标
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功能 经典Wnt信号通路的关键下行成分。 在缺乏Wnt的情况下,与AXIN1、AXIN2、APC、CSNK1A1和GSK3B形成复合物,促进N末端Ser和Thr残基的磷酸化,并通过BTRC泛素化CTNNB1,随后被蛋白酶体降解。 在Wnt配体的存在下,CTNNB1不是泛素化的,而是聚集在细胞核中,在细胞核中充当TCF/LEF家族转录因子的辅激活剂,从而激活Wnt应答基因。 参与细胞粘附的调节。 大多数β-catenin定位于细胞膜,是E-cadherin/catenin粘附复合物的一部分,拟将钙粘蛋白偶联到肌动蛋白细胞骨架。 -
组织特异性 表达于几种毛囊细胞类型:基底和外周基质细胞,以及内外根鞘细胞。 以冒号表示。 -
疾病相关 CTNNB1缺陷与结直肠癌(CRC)有关[MIM:114500]。 注:CTNNB1的激活突变具有致癌活性,导致肿瘤发展。 体细胞突变存在于各种肿瘤类型中,包括结肠癌、卵巢癌和前列腺癌、肝母细胞瘤(HB)、肝细胞癌(HCC)。 乙肝是一种恶性胚胎性肿瘤,主要影响生命最初三年的幼儿。 CTNNB1缺陷是毛瘤(PTR)的原因[MIM:132600]; 一种常见的良性皮肤肿瘤。 CTNNB1缺陷是髓母细胞瘤(MDB)的原因[MIM:155255]。 MDB是一种恶性侵袭性小脑胚胎性肿瘤,在儿童中有优先表现。 CTNNB1缺陷是卵巢癌(OC)易感性的一个原因[MIM:167000]。 卵巢癌起源于卵巢组织的常见恶性肿瘤。 尽管已经描述了许多卵巢肿瘤的组织学类型,但上皮性卵巢癌是最常见的形式。卵巢癌通常无症状,即使是晚期疾病,其公认的症状和体征也是模糊的。 因此,大多数患者被诊断患有晚期疾病。 注=涉及CTNNB1的染色体畸变见于涎腺多形性腺瘤,这是涎腺最常见的良性上皮肿瘤。 用PLAG1易位t(3;8)(p21;q12)。 -
序列相似性 属于beta-catenin家族。 包含12个ARM重复。 -
翻译后修饰 GSK3B的磷酸化需要另一激酶预先磷酸化Ser-45。 然后,磷酸化从Thr-41进行到Ser-37和Ser-33。 EGF刺激酪氨酸磷酸化。 Tyr-654上的磷酸化降低CDH1结合并增强TBP结合。 当GSK3B磷酸化时,SCF(BTRC)E3连接酶复合物泛素化,导致其降解。 被包含UBE2D1、SIAH1、CACYBP/SIP、SKP1、APC和TBL1X的E3泛素连接酶复合物泛素化,导致其随后的蛋白酶体降解。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 细胞质>细胞骨架。 细胞连接>粘附物连接。 细胞连接。 细胞膜。 当其不稳定(高水平磷酸化)或与CDH1结合时为细胞质。 当其稳定时转移到细胞核(低水平磷酸化)。 与GLIS2和MUC1的相互作用促进核移位。 与EMD的相互作用抑制核定位。 -
UniProt提供的信息 -
别名 β-连环蛋白 β连环蛋白 连环蛋白
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应用
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图片
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车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物20μg 车道2: CTNNB1敲除HCT 116细胞裂解物20μg Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级染色,稀释1/5000,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32572 被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解液中在95 kDa处观察到一条带,在CTNNB1敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约273712 (敲除细胞裂解物ab275247)。 在低于95 kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表β-连环蛋白的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1敲除HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物20μg 车道2: CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解物20μg Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级染色,稀释1/5000,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约32572 被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解液中观察到95kDa的条带,在CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约273712 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物ab275247)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于95 kDa的裂解物通道中观察到的条带可能代表β-连环蛋白的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物20μg 车道2: CTNNB1敲除HCT 116细胞裂解物20μg Western blot假彩色图像:抗β-连环蛋白抗体[IGX4794R-3]以1μg/ml染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约223075 被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解物中观察到95kDa的条带,而在CTNNB1敲除细胞系中没有观察到该大小的信号 约273712 (敲除细胞裂解物ab275247)。 在低于95 kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表β-连环蛋白的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1敲除HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HCT 116细胞裂解物20µg 车道2: CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解液20µg 蛋白质印迹的假彩色图像:1µg/ml的抗β-儿茶素抗体[IGX4794R-3]染色,显示为绿色; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )在1/20000稀释度下的负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约223075 被证明与β-连环蛋白特异结合。 在野生型HCT 116细胞裂解液中观察到95kDa的条带,在CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约273712 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物ab275247)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于95 kDa的裂解物通道中观察到的条带可能代表β-连环蛋白的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和CTNNB1 CRISPR-Cas9编辑的HCT 116细胞裂解物。 首先在SDS-PAGE凝胶上运行44个样品,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4时与一级抗体孵育过夜 ° C.在TBS-T,中清洗四次斑点,与二级抗体在室温下孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HCT116细胞裂解物20 ug 车道2: CTNNB1敲除HCT116细胞裂解物20 ug 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约223075 在95 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约223075 western blot显示在野生型HCT 116细胞中与抗β-连环蛋白反应,在CTNNB1敲除细胞系中观察到信号丢失 约273712 (CTNNB1敲除细胞裂解液ab275247)。 对HCT 116野生型和CTNNB1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在TBS-T(0.1%吐温)中50%(v/v)的荧光蛋白印迹(TBS-based)封闭溶液中封闭膜 ® )孵育前 约223075 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4时过夜 ° C分别为1 ug/ml和1:20000稀释液。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因-1:7个碱基插入,外显子3 14个碱基缺失。
实验方案
数据表及文件
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