概述
-
产品名称 人 VCAM1敲除A549细胞株 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2中4 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全等级 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约275463 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
-
单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
新冠肺炎疫苗
靶标
-
功能 在细胞间识别中很重要。 似乎在白细胞-内皮细胞粘附中起作用。 与白细胞上的β-1整合素VLA4相互作用,并介导粘附和信号转导。 VCAM1/VLA4相互作用可能在免疫反应和白细胞向炎症部位迁移中发挥病理生理作用。 -
组织特异性 在炎症血管内皮细胞以及正常组织和炎症组织中的巨噬细胞样细胞和树突状细胞类型上表达。 -
序列相似性 包含7个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 -
结构域 VLA4依赖性细胞粘附需要第一或第四Ig样C2型结构域。 -
翻译后修饰 唾液糖蛋白。 -
细胞定位 膜。 -
UniProt提供的信息
相关产品
-
重组蛋白 -
相关产品
应用
|
||
|
|
|
图片
-
所有车道: 抗-VCAM1抗体[EPR5047]( ab134047号 )稀释1/2000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: 野生型A549 TNF-a处理的(10ng/mL,16h)细胞裂解物 3号车道: VCAM1敲除A549细胞裂解物 车道4: VCAM1敲除物A549 TNF-a处理的(10 ng/mL,16h)细胞裂解物 车道5: HUVEC细胞裂解物 车道6: HUVEC TNF-a处理的(16 ng/mL,16h)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 105千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-6: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab134047号 在105 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])在55 kDa时观察到。 ab134047号 在经处理的野生型A549细胞中与VCAM1反应,在经处理的VCAM1敲除细胞系ab273758(敲除细胞裂解物 约275504 ). 对野生型A549和VCAM1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab134047号 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])在4°C下过夜,稀释率分别为1:2000和1:20000。 将印迹物与HRP结合的山羊抗兔(H+L)和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和VCAM1敲除A549细胞(红线,ab273758),用10 ng/ml TNF-α处理16小时(左)和未处理(右),用 约103173 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再进行抗体( 约103173 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 以与一级抗体相同的浓度和条件(野生型A549-黑线VCAM敲除A549-灰线)使用同种对照抗体小鼠IgG1κ别藻蓝蛋白。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用40 mW红色激光器(638nm)和660/10带通滤波器采集了5000多个事件。 -
所有车道: 抗-VCAM1抗体[EPR5038(2)]( 约174279 )稀释1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: 野生型A549 TNF-a处理的(10ng/mL,16h)细胞裂解物 3号车道: VCAM1敲除A549细胞裂解物 车道4: VCAM1敲除物A549 TNF-a处理的(10 ng/mL,16h)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 105千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 20秒 公元174279年 western blot显示在处理过的野生型A549细胞中与VCAM1反应。 处理VCAM1敲除细胞系ab273758(敲除细胞裂解物 约275504 )已使用。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 公元174279年 在4°C下隔夜,稀释率为1/1000。 在使用Optiblot ECL试剂进行显影之前,在室温下用HRP结合的山羊抗兔(H+L)二级抗体在1/5000的浓度下孵育印迹1小时( 约133456 )和图像。 -
等位基因1:第2外显子4 bp缺失
数据表及文件
-
SDS下载 -
数据表下载