概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约255450 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻培养基DMSO无血清培养基,在补充有甲基纤维素的MEM中含有8.7%DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化准则: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 阿米洛宁X,Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8、11 D16S539:11、12 vWA:14个 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 对单核细胞和T淋巴细胞具有趋化性。 绑定到CXCR3。 -
序列相似性 属于海间α(趋化因子CxC)家族。 -
翻译后修饰 CXCL10(1-73)是角质形成细胞分泌后通过蛋白水解裂解产生的。 -
细胞定位 保密。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
重组蛋白 -
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SimpleStep ELISA试剂盒
应用
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图片
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所有车道: 抗IP10抗体[EPR7850]( 约137018 )稀释1/500 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y( ab259377号 )(100 ng/ml,32小时)和TNF-α( 约259410 )(10 ng/ml),持续32小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10淘汰赛A549 IFN-y( ab259377号 )(100 ng/ml,32小时)和TNF-α( 约259410 )(10 ng/ml),持续32小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 10千Da 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约137018 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约137018 在蛋白质印迹中显示与A549野生型细胞中的IP10反应,在IP10敲除细胞系ab266969中观察到信号丢失(IP10敲除细胞裂解物 约256886 ). 对A549野生型和IP10敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约137018 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
用重组人干扰素γ蛋白刺激野生型A549对照细胞或IP-10敲除A549细胞(ab266969),使其生长到40%融合( ab259377号 )100 ng/ml和重组人TNFα蛋白( 约259410 )在10 ng/ml或对照组中静置16或32小时。 用重组人干扰素γ蛋白刺激生长到40%融合的THP-1细胞( ab259377号 )浓度为200 ng/ml,LPS浓度为50 ng/ml或溶媒对照24小时。 重复测量细胞培养上清液中的IP-10(CXCL10)浓度,并根据IP-10标准曲线进行插值。 在未稀释的上清液中测量来自车辆对照样品的IP-10,并将处理过的样品稀释200倍。 绘制插值稀释因子校正值(平均值+/-SD,n=2)。 -
纯合物:外显子2中插入1bp
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载