(美国)
-
产品名称 -
亲代细胞系 赫拉 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子3中1 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
试验 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255448年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
-
单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
-
功能 典型Wnt信号通路的关键下游成分。 在缺乏Wnt的情况下,与AXIN1、AXIN2、APC、CSNK1A1和GSK3B形成复合物,促进N末端Ser和Thr残基的磷酸化,并通过BTRC泛素化CTNNB1,随后被蛋白酶体降解。 在Wnt配体的存在下,CTNNB1不是泛素化的,而是聚集在细胞核中,在细胞核中充当TCF/LEF家族转录因子的辅激活剂,从而激活Wnt应答基因。 参与细胞粘附的调节。 大多数β-catenin定位于细胞膜,是E-cadherin/catenin粘附复合物的一部分,拟将钙粘蛋白偶联到肌动蛋白细胞骨架。 -
组织特异性 表达于几种毛囊细胞类型:基底和外周基质细胞,以及内外根鞘细胞。 以冒号表示。 -
疾病相关 CTNNB1缺陷与结直肠癌(CRC)相关[MIM:114500]。 注:CTNNB1的激活突变具有致癌活性,导致肿瘤发展。 体细胞突变存在于各种肿瘤类型中,包括结肠癌、卵巢癌和前列腺癌、肝母细胞瘤(HB)、肝细胞癌(HCC)。 乙肝是一种恶性胚胎性肿瘤,主要影响生命最初三年的幼儿。 CTNNB1缺陷是毛瘤(PTR)的原因[MIM:132600]; 一种常见的良性皮肤肿瘤。 CTNNB1缺陷是髓母细胞瘤(MDB)的原因[MIM:155255]。 MDB是一种恶性的、侵袭性的小脑胚胎性肿瘤,在儿童中最常见。 CTNNB1缺陷是卵巢癌(OC)易感性的一个原因[MIM:167000]。 卵巢癌起源于卵巢组织的常见恶性肿瘤。 尽管已经描述了许多卵巢肿瘤的组织学类型,但上皮性卵巢癌是最常见的形式。卵巢癌通常无症状,即使是晚期疾病,其公认的症状和体征也是模糊的。 因此,大多数患者被诊断患有晚期疾病。 注=涉及CTNNB1的染色体畸变见于涎腺多形性腺瘤,这是涎腺最常见的良性上皮肿瘤。 用PLAG1易位t(3;8)(p21;q12)。 -
序列相似性 属于beta-catenin家族。 包含12个ARM重复。 -
翻译后修饰 GSK3B的磷酸化需要另一种激酶预先磷酸化Ser-45。 然后磷酸化从Thr-41进行到Ser-37和Ser-33。 EGF刺激酪氨酸磷酸化。 Tyr-654上的磷酸化降低CDH1结合并增强TBP结合。 当GSK3B磷酸化时,SCF(BTRC)E3连接酶复合物泛素化,导致其降解。 被包含UBE2D1、SIAH1、CACYBP/SIP、SKP1、APC和TBL1X的E3泛素连接酶复合物泛素化,导致其随后的蛋白酶体降解。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 细胞质>细胞骨架。 细胞连接>粘附连接。 细胞连接。 细胞膜。 当其不稳定(高水平磷酸化)或与CDH1结合时为细胞质。 当其稳定时转移到细胞核(低水平磷酸化)。 与GLIS2和MUC1的相互作用促进核移位。 与EMD的相互作用抑制核定位。 -
UniProt提供的信息
相关产品
-
KO细胞裂解物 -
相关产品
美国
|
|
图片
-
所有车道: 抗β-连环蛋白非磷酸(活性)S37/T41抗体[EPR23969-131]( 约246504 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: CTNNB1(β-连环蛋白)敲除HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye®800CW)( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 85千帕 观察到的频带大小: 95千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻隔和稀释缓冲液及浓度:Intercept®(TBS)阻隔缓冲液用等体积0.1%TBST稀释 观察到的分子量与文献中描述的一致(PMID:16288032)。 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约246504 在92 kDa下观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠单克隆[6C5]到GAPDH)在36 kDa时观察到。 约246504 抗β-儿茶素(非磷酸化(活性)S37/T41)抗体[EPR23969-131]显示在野生型HeLa细胞中与β-儿茶素特异性反应。 当敲除细胞系ab255352(敲除细胞裂解物 约263756 )被使用。 对野生型和β-连环蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约246504 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 观察到大约45kDa的额外带。 -
所有车道: 抗β-连环蛋白抗体[E247]-ChIP级( 约32572 )稀释1/500 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: CTNNB1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 85千帕 观察到的频带大小: 86千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约32572 在86 kDa下观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约32572 western blot显示与野生型HeLa细胞中的CTNNB1反应。 当敲除细胞系ab255352(敲除细胞裂解物 约263756 )已使用。 对野生型HeLa和CTNNB1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约32572 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第3外显子1 bp缺失。
数据表及文件
-
SDS下载 -
数据表下载