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炸薯条的详细程序和提示。
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所有溶液都需要是冰冷的。
含蔗糖的溶液必须在当天新鲜配制。
使用前,在所有裂解液中加入蛋白酶抑制剂(0.1 mM PMSAF市场)
更多 炸薯条资源和产品
阅读本 炸薯条方案后,查看更多炸薯条检测/染色质免疫沉淀资源和产品,或直接获得重要的 炸薯条数据:
-经过仔细验证的炸薯条抗体,包括重组兔单克隆抗体,旨在年复一年地提供完全相同的性能
-灵活的染色质提取试剂盒 ab117152号,用于提取天然、交联、剪切或未剪切的染色质
-易于上手的炸薯条巴基斯坦大约500英镑,或来自炸薯条系列试剂盒产品的其他试剂盒。
用 5毫升消化缓冲液重悬细胞核团块,检查细胞核混悬液稀释样品在 260纳米和280纳米处的吸光度比值;根据 A260型(美国)DNA浓度(A260/A280的比值应约为 1.1)。
染色质产量 (微克)表示为:A260×稀释因子 × 体积 × 50。离心样品 (10000转/分,10分钟,4°C)在 1.7毫升Eppendorf管中以 0.5毫克/毫升重悬细胞核团块。如有必要,分成 1毫升等分试样。
通常,我们在 1.0毫升反应体积中按每 0.5毫克DNA加入 库存50件微球菌核酸酶的标准添加微球菌核酸酶。微球菌核酸酶通常以粉末形式提供;将微球菌核酸酶溶于 dH20直至所需浓度,小份储存于 -20摄氏度条件下,可再次冷冻并重复使用一次。这个步骤需要小心控制,特别是在最初的准备工作中。
高浓度的微球菌核酸酶可能过度消化染色质,产生亚核小体颗粒。您的目标应为获得长/中寡核苷酸体梯形。如果需要制备纯的单核小体,需进行线性蔗糖梯度离心 (5-20%),这将提高分离度。
用 250μL 1.0%十二烷基硫酸钠/孵育缓冲液清洗琼脂糖凝胶,并立即离心(2000克,10分钟,4°C)去除 序号并与上一步得到的先从结合组分合并存放。
在各结合组分中加入 500微升孵育缓冲液,以将 SDS公司浓度降低至 0.5%十二烷基硫酸钠然后按照以下方法处理未结合和结合组分:
或者,通过实时 聚合酶链反应定量测定 DNA水聚合酶链反应仪提供的软件设计。
10×TBS
0.1 M Tris-HCl(pH 7.5)
150万氯
30毫米氯化钙
20毫米氯化镁
50毫米丁酸钠 (pH值8.0)
消化缓冲液
0.32万蔗糖
50 mM Tris-HCl(pH 7.5)
4毫微米氯化镁
1毫摩尔氯化钙
0.1毫微米PMSF
5毫米丁酸钠
裂解缓冲液
1.0 mM三氯化碳(pH7.4)
0.2毫米乙二胺四乙酸二钠 (乙二胺四乙酸钠)
0.2毫微米PMSF
孵中国
50毫米氯化钠
20 mM Tris-HCL(pH 7.5)
20毫米丁酸钠
5毫米乙二胺四乙酸二钠 (乙二胺四乙酸钠)
缓冲液一个
10毫米第四次(EDTA)
缓冲液B类
50 mM Tris-HCL(pH 7.5)
10毫米乙二胺四乙酸 (EDTA)
100毫摩尔氯化钠
缓冲液C类
150毫米氯化钠
蛋白一个琼脂糖凝胶
4摄氏度下,在缓冲液 A类中预溶胀蛋白 A类琼脂糖凝胶过夜。离心(10000 x克,10分钟)并在大约等体积 (50%v/v)缓冲液 A类中重悬沉淀物。
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