氨基糖苷类是一类广谱抗生素，用于治疗严重的革兰氏阴性细菌感染，它们以16S RNA亚单位为靶点，结合后导致翻译错误，最终诱导杀菌作用[1]。氨基糖苷核苷酸转移酶（2“）-Ia（ANT（2”）-Ia）是一种氨基糖苷修饰酶，可阻止氨基糖苷与核糖体亚单位结合，使该酶成为基于结构的主要候选药物设计[2]。ANT（2”）-Ia的表征已被证明是困难的，因为过表达蛋白质的稳定性和溶解度较低，其中95%的蛋白质以包涵体的形式表达[3]。我们描述了一种方案，该方案已成功表达和纯化ANT（2”）-Ia。还采用了一种成功的酶分析方法，该蛋白在这些条件下具有活性和稳定性，比活性为0.14 U/mg。此外，核磁共振（NMR）研究允许分配176个非脯氨酸骨架残基中的144个。底物结合核磁共振实验显示，结合ATP和妥布霉素时，存在独特的全局化学位移扰动，表明每种底物都有独特的结合位点。可以利用核磁共振结合x射线晶体学对ANT（2“）-Ia的结构进行测定，以开发作为更有效氨基糖苷的小分子，从而抑制ANT（3”）-Ia结合和修饰这些抗生素。
