Gel Filtration : Desalting & Buffer Exchange PhyTip®Columns

脱盐、更换缓冲液;凝胶过滤移液管芯片型PhyTip®列数
biotage_phynexus gel filtration
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凝胶过滤PhyTip®色谱柱是在移液管芯片上搭载树脂的独特SEC(Size Exclusion Chromatography)。因为树脂被夹在上下的屏幕上,所以不会泄漏也不会丢失。因为屏幕的素材是亲水性的,所以用少量的缓冲液覆盖整体,所以可以抑制珍贵样品的“损失”。

在凝胶过滤PhyTip柱中,盐等小分子进入树脂的“小孔”中,由于通过需要时间,所以慢慢地从柱中溶出。另一方面,抗体等更大的分子不能侵入那里,所以会迅速从色谱柱中溶出。

利用这种独特的移液管芯片型凝胶过滤PhyTip柱,不仅迅速、准确地去除了95%以上的盐,而且成功回收了80%以上的蛋白质。

抗体的凝集是抗体医药安全性的重大问题之一。为了解决这个问题,研究人员用不同的条件和多方面的手法分析评价医药的安全性。预处理,例如取代去除有毒盐的缓冲液,需要大量的时间和精力。

因此,通过组合凝胶过滤PhyTip柱和电动移液管,12个样品约30分钟,96个样品约3小时就能处理。而且,凝胶过滤PhyTip色谱柱由于是移液管芯片型,所以与具有8、12和96通道头的各公司的液体处理器的相性很好,与自动化High-throughput相对应成为需要迅速且正确的预处理的研究员的可靠的伙伴吧。

通过利用凝胶过滤PhyTip柱,可以减少样品前处理的工夫和时间,顺利地进行毒性试验等分析评价。

特征

  1. 去除95%以上的盐,80%以上的蛋白质的回收率
  2. 支持自动化高强度put
  3. 自上而下的自由下落(不是吸引、喷出)
  4. 不损害抗体和蛋白质功能的分离
  5. 高重现性(少样品间参差不齐;10%以下CV)

凝胶过滤IgG PhyTip®用色谱柱从色素中分离并回收的实验的例子

[条件]

  1. 凝胶过滤PhyTip柱(1mL芯片配备200µL的5K树脂)
  2. IgG(2 mg/mL)
  3. PBS(色谱柱的平衡化和切换器)

[实验步骤]

  1. 用PBS平衡凝胶过滤PhyTip柱
  2. 向色谱柱中注入40µL的IgG(2mg/mL)
  3. 向色谱柱中注入130µL的PBS作为切换器
  4. 样品回收
表格
biotage phynexus gel filtration

[实验结果的解说(参照表)]

平均在70%以上的IgG回收率下,浓度达到0.5mg/mL。死卷较少,最终量平均回收121µL。除了IgG的回收率和浓度之外,在最终的回收量中,偏差(CV值)非常少。

凝胶过滤蛋白质PhyTip®用色谱柱从盐中分离并回收的实验实例

[条件]

  1. 凝胶过滤PhyTip柱(1mL芯片配备600µL的5K树脂)
  2. Myoglobin(16.7 KDa; 茶色)
  3. DNP-glutamate(313 Da; 黄色)
  4. PBS(色谱柱的平衡化和切换器)

[实验步骤]

  1. 用PBS平衡凝胶过滤PhyTip柱
  2. 向色谱柱中注入200µL的样品溶液(Myoglobin+DNP-glutamate的mixture)
  3. 向色谱柱中注入100µL的PBS作为切换器
  4. 每隔2-3分钟将样品收集到管中
绘图
biotage phynexus gel filtration

[实验结果的解说(参照图)]

A;200µL样品溶液
B; 进样后回收的流通
C-F;加入100µL PBS后回收的溶液
G;加入400µL PBS后回收的溶液

将样品注入凝胶过滤PhyTip柱后,每隔2-3分钟将PBS注入柱中,将溶出的液滴回收到埃文中。从2到4段溶出Myoglobin(茶色),之后的5和6段溶出DNP-glutamate(黄色)。yoglobin不能侵入树脂的「小孔」迅速溶出了,不过,DNP-glutamate,因为进入树脂内,慢慢地溶出了。

与自动精制装置组合

与自动精制装置组合,可以同时处理多检体

12个样品的AAV在30分钟内纯化
其他公司生产的liquid handler
    • HAMILTON
    • BECKMAN COULTER
    • TECAN
    • PerkinElmer
    • Agilent Technologies

订单信息

 

产品编号 芯片尺寸 产品名称 数量
PDR-91-20-06 PhyTip®1 mL format     5K Gel Filtration (96/pk) 96
PDR-91-20-17   30K Gel Filtration (96/pk)
PDR-91-60-06     5K Gel Filtration (96/pk)
PDR-91-60-17   30K Gel Filtration (96/pk)

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