特征
- 核酸提取约15分钟
- 吸移管操作数极少
- 不需要苯氯
- 1管抽出
- 提取中无核酸丢失
icroGEM公司的prepGEM(prepGEM)核酸提取试剂盒,只需将样品和试剂混合,用热循环器进行温度处理就可以提取核酸。提取的核酸可用于PCR、qPCR等。可用于CRISPR-Cas9等的基因组编辑后的分析。
原理
prepGEM核酸提取配套元件使用75℃附近为最适温度的耐热性蛋白酶EA1提取核酸。EA1可以在不含SDS的温和缓冲液中发挥活性,因此EA1在95℃热变性后的溶液可以直接用于PCR和逆转录反应的铸型。由于没有色谱柱处理、酚-氯仿萃取、乙醇沉淀等步骤,因此可以快速简单地完成萃取。
协议
通过下述3步,可用于PCR、qPCR、STR、扩增子序列等的核酸的提取完成。所需时间约为15分钟。定量请使用PicoGreen、iQuant、Qubit等荧光色素法。 应用程序示例
套件类型
有如下5种配套元件。请选择适合样品和抽取对象的配套元件。提取核酸时的温度程序请下载各配套元件的快速启动指南或日语简易手册。
样本 | 提取对象 | 工具包名称 | 快速启动 Guide(英语) | 日语简单 手册 |
---|
培养细胞、血液、唾液、组织、动物样品(鼠尾、耳朵、昆虫、鱼类)、天鹅 | DNA | prepGEM Universal Kit | PDF | PDF |
革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、原生菌、古细菌、菌落、液体培养、生物膜、粘膜检体、拭子、元基因组解析 | DNA | prepGEM Bacteria KPDF | PDF | PDF |
用哺乳动物培养细胞、LCM、流式细胞仪分离的细胞 | RNA | RNAGEM Kit | PDF | PDF |
唾液或血液(液体、拭子、污迹、FTA卡)、组织、毛发、烟头 | DNA | forensicGEM Universal Kit | PDF | PDF |
精液(液状、干燥、染色) | DNA | forensicGEM Sperm Kit | PDF | PDF |
PDQeX核酸提取仪器
影片
耐热性蛋白酶EA1和prepGEM核酸提取配套元件的介绍电影。
国内使用例
用prepGEM Universal Kit从基洛果蝇中提取DNA,进行了30个周期的PCR。个体1只、翅膀1张、中肢1根等微量样品也可以扩增靶基因。如果提高循环数的话,可以得到明确的频带。
套件名称:prepGEM Universal Kit
缓冲区:BLUE Buffer
提取液量:50μL
温度处理:75℃15分钟⇒95℃2分钟⇒4℃HOLD
样品:个体、翅膀、中肢均不磨碎,用prepGEM进行DNA提取
温度处理结束后目视检查,个体、翅膀、中肢都基本保持原形
PCR液量:25μL
铸型液量:个体2μL、翅10μL、中肢10μL