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TJP1(ZO1紧密连接)、TJP2和TJP3是密切相关的支架蛋白,可以将紧密连接(紧密连接,TJ)跨膜蛋白连接到肌动蛋白细胞骨架。紧密连接的作用是限制物质通过细胞旁间隙的移动,并作为上皮细胞和内皮细胞组成不同的顶端和基底外侧质膜区域之间的边界。
北欧端可能参与传递紧密连接组装所需的信号,而C类端可能具有紧密连接的特定特性,其α结构域可能与稳定连接有关。
在伪足小体形成及其相关功能中发挥重要作用,从而调节细胞粘附和基质重塑。
在大多数上皮细胞连接中发现含有α的长异构体。而较短的异构体常见于内皮细胞、高度特化的肾小球上皮连接处和细精管的支持细胞。
ZO1紧密连接蛋白定位于细胞膜,细胞连接和伪足小体。
可以在细胞与细胞接触的同时,从细胞质进入细胞膜。
人(Q07157):195kDa(预测) 短承包商:187kDa(预测)
鼠(P39447):195kDa(预测)
鼠(A0A0G2K2P5):197kDa(预测)
存在磷酸化修饰,可被PTPRJ公司
Hela everse胞系统
p TJP1海拉细胞系/ 细胞裂解物( 约257744)
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
电泳
对于分子量较大的靶标蛋白,推荐使用8%浓度的分离胶进行电泳。
建议使用阳性对照。
20微克总蛋白进行电泳。
膜
建议在转膜缓冲液中加入SDS为0.1%
建筑用0.45μm PVDF
建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。