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非受体酪氨酸激酶,参与细胞周期进程、凋亡、有丝分裂重组、遗传不稳定性和组蛋白修饰等过程。
质量中心,质量中心(GHR)、(PRLR)、(LEPR)、中国(EPOR)、(THPO)型受体;或干扰素α、干扰素β、干扰素γ和多种白细胞介素等二、
配体与细胞表面受体的结合,会引起受体细胞质尾部的特定酪氨酸残基磷酸化,为统计数据蛋白创建对接位点。
JAK2号机组的自磷酸化十分重要,能够调节其自身活性。
JAK2号机组在大多数组织中普遍表达,比如血液、骨髓和淋巴结等。
JAK2号机组定位于细胞核、内膜系统。
人(O60674):130 kDa(预测值)
鼠(Q62120):130 kDa(预测)
鼠(Q62689):130 kDa(预测)
存在多个磷酸化修饰位点。
未处理的样本(例如:细胞/脑组织)较难检测到Y1007+Y1008 JAK2蛋白,建议使用过钒酸盐进行预刺激处理。
建议根据检测的JAK2号机组蛋白形式,使用相应的阳性对照。
蛋白的预测分子量约为130kDa因此在电泳和转膜过程中,请根据大蛋白实验注意事项进行操作。
JAK2:K562、Jurkat、A549、C6等细胞裂解液。
JAK2(磷酸Y1007+Y1008):50mM Pervanadate
JAK2 A549/术语(约256963)
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
对于磷酸化修饰蛋白添加复合磷酸酶抑制剂,以防止蛋白在提取时被去磷酸化。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
建议使用阳性对照。
电泳
对于分子量较大的靶标蛋白,建议使用8%浓度的分离胶进行电泳。
转膜
建议在转膜缓冲液中加入SDS为0.1%
建筑用0.45μm PVDF
建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。