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RIP3(RIPK3)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可激活坏死和凋亡这两种平行的细胞死亡形式。
裂土3批准MLKL公司的磷酸化,促进MLKL公司定位到质膜并执行程序性坏死,其特征是钙内流和质膜损伤。
RIPK3段可以结合代谢酶GLUL、GLUD1和PYGL并增强它们的活性;这些代谢酶可能通过刺激三羧酸循环和氧化磷酸化反应,增强ROS公司
在胰腺高度表达。 在心脏、胎盘、肺和肾脏中检测到表达水平较低。
异构体3:在结肠癌和肺癌中表达显著增加。
细胞质
人(Q9Y572):1:56.9 kDa(预测);异构体2-3:25.3-27.6 kDa(预测值)
(Q9QZL0):53.3 kDa(预测)
(Q9Z2P5):52.2 kDa(预测)
RIPK3和RIPK1可自磷酸化和相互转磷酸化,血清-199 RIPK3在坏死过程中发挥作用;ZBP1 RIPK3 Ser-227位点的自磷酸化,RIPK3段的自磷酸化是坏死的标志,也是结合MLKL公司
BIRC2/c-IAP1和BIRC3/c-IAP2 RIPK3 Lys-48和Lys-63位的多聚泛素化修饰,从而激活NF-kappa-B稳定性PELI1和STUB1 RIP3蛋白多聚泛素化修饰,导致其随后被蛋白酶体降解。
独立电源3非遍在表达,并且在很多细胞中不表达,此外在不同组织和细胞中表达水平可能不同,因此建议设置阳性和阴性对照。
独立电源3可被磷酸化和多聚泛素化修饰,多聚泛素化修饰导致其非常容易被蛋白酶体降解。因此工作分解结构实验可能会出现多带或条带大小发生变化现象。建议使用新鲜制备的裂解液跑电泳。
RIP3方式献或产品说明
撕裂3:(ab125566型)
RIP3(磷酸化T231+S232):20 ng/ml TNF-a、100 nM Smac模拟物和20µM z-VAD全细胞裂解液。
RIP3(磷酸化S232):20 ng/ml TNFα、100 nM Smac模拟物和20µM z-VAD 12全细胞裂解液。
RIP3(磷酸化S227):20 ng/ml TNFα、100 nM Smac模拟物和20 mM z-VAD全细胞裂解液。
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
磷酸化修饰蛋白检测需添加复合磷酸酶抑制剂。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
建议使用阳性和阴性对照。
转膜
强烈建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。