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PGC1α(过氧化物酶体增殖物激活受体γ-α)是类固醇受体和核受体的转录共激活剂。
PGC1α增加解偶联蛋白启动子上PPARG公司和甲状腺激素受体的转录活性。
PGC1α可以调节有助于适应性产热过程的关键线粒体基因。
PGC1α通过协调参与葡萄糖和脂肪酸代谢的多种基因的表达,在响应膳食供应的代谢重编程中发挥重要作用。它的表达水平受长期能量供应的控制,在高脂饮食或肥胖环境下表达水平下降。
PGC1α-ESRRA依赖性方式诱导骨骼肌中 PERM1(许可证)
PGC1α参与昼夜节律和能量代谢的整合。通过激活RORA和RORC(PDK4和PEPCK)调控生物钟基因(ARNTL/BMAL1和NR1D1)
PGC1α长期以来被认为是治疗二型糖尿病、肥胖症、心肌病或其他代谢紊乱的潜在治疗靶点。
PGC1α的表达在不同组织间差异很大。它在适应性产热和能量代谢过程相关组织中高度表达。
PGC1α在棕色脂肪分化早期被诱导,与白色脂肪细胞相比,它优先在成熟的棕色脂肪细胞中表达。
PGC1α种异构体,在小鼠中有 4种异构体。
在心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏中高表达。
中国
在肠道和白色脂肪组织中的表达水平非常低。
PGC1α的定位依赖于其乙酰化状态,可以定位于细胞质和细胞核中。在氧化应激(如活性氧)条件下变得更倾向定位于细胞核。
人(Q9UBK2):人1/B4/B5:90-92 kDa(预测) 异构体 9:77 kDa(预测) 异构体 NT-7a/B4-8a/B5-NT/8a:30-33kDa(预测值) 异构体 B4-3分机:15 kDa(预测值)
(O70343):1:91 kDa(预测)2~3:41-42 kDa(预测)4:30 kDa(预测)
鼠(Q9QYK2):91 kDa(预测)
PGC1α存在乙酰化、磷酸化和泛素化修饰
PGC1α多存在于细胞核中,所以在工作分解结构实验中使用核裂解液有助于获得理想实验结果。
PGC1α只高表达于特定的组织细胞中,有些样本可能会出现弱表达或无表达的情况。请选择合适的实验样本,推荐使用阳性对照,以确认实验体系没有问题。
PGC1α存在多种异构体,分子量差异较大(预测15-92 kDa)所以在工作分解结构实验中可能会出现多条条带,或实际检测到的条带大小与预测值不同。通常预测分子量77kDa的异构体只能在肝脏细胞中检测的到;预测分子量90 kDa=PGC1α异构体可能在心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏表达。有些样本可能检测到预测分子量为30 kDa PGC1α
建议使用新鲜制备的裂解液,尽量避免蛋白降解引起杂带现象。
小鼠棕色脂肪组织、骨骼肌组织裂解液
人心脏组织裂解液
大鼠肾脏组织裂解液
3T3-L1和HepG2
小鼠白色脂肪组织裂解液
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添够酶靶
超声破碎样本以富集更多的PGC1α
不要裁膜,保留全膜进行实验。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
转膜
强烈建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。