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MLKL TNF公司诱导的程序性细胞坏死过程中起关键作用。
MLKL公司属于蛋白激酶超家族,包含一个蛋白激酶样结构域,但是蛋白激酶结构域无催化活性。是拥有激酶结构域,但是没有激酶功能的假激酶。
撕裂3磷酸化后激活,定位于质膜并执行以钙流入和质膜损伤为特征的坏死性凋亡。
和TNF诱导的坏死性凋亡外,细胞核内也可能发生坏死性凋亡。在被 ZBP1、MLKL、中国RIPK3磷酸化,导致核被膜破坏和细胞 DNA中国
MLKL裂土3的相互作用是有物种特异性的:人类 MLKL RIPK3相互作用,而不与小鼠 RIPK3工作
MLKL(p-MLKL)是坏死性凋亡的触发因素。它不存在于正常组织中,只能在感染、细胞受损或老化组织中检测到。
MLKL公司激活后会形成同源三聚体。
p-MLKL型需要坏死性凋亡诱导刺激(TSZ-TNF a+Smac模拟+z-VAD)之后,才能检测得到。
MLKL公司定位于细胞质,在发生坏死性凋亡时异位至质膜。当响应正粘病毒感染时定位于细胞核。
人(Q8NB16):1-230~54 kDa(预测)
(Q9D2Y4):1-253~54 kDa(预测)
磷酸化修饰。
可以被针对细胞程序性坏死的抑制剂坏死磺酰胺(NSA)
MLKL公司的激活不仅需要被RIPK3段磷酸化,并且需要结合高度磷酸化的磷酸肌醇。
样本需要坏死性凋亡的诱导刺激,如TSZ(TNFα+Smac模拟物+z-VAD)处理之后,才能检测到p-MLKL
建筑业MLKL信号通路中上下游指标,确认诱导是否成功。
进行磷酸化修饰检测时,请先确认细胞内MLKL公司总蛋白的含量。
使用新鲜制备的样本,防止冻存样本导致磷酸化修饰减弱,并添加合适的磷酸酶抑制剂。
推荐根据蛋白修饰不同,使用合适的阳性对照。
如果使用常规裂解方法,检测到蛋白信号较弱时,我们建议尝试使用 1%十二烷基硫酸钠这是一个很好的例子
MLKL:Huvec、HeLa sopeles
p-MLKL:TNFα+Smac模拟物+z-VAD 8相当于HT-29
MLKL HeLa系统(ab255408号)/细胞裂解物(约263788)。
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
转膜
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。
抗体孵育
请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。
建议使用新鲜配置抗体,不重复利用。
建议一抗、二抗用封闭液稀释。
推荐添加只加二抗不加一抗的对照。
PMID:22265413、22265414、24316671、27959630、30467385