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雌激素受体α(ERα)是核激素受体家族编号3亚家族成员,参与靶细胞的增殖、分化与稳态。
ERα作为经典的核受体,不仅能通过雌激素应答元件(雌激素反应元件,ERE)调节靶基因转录,还可结合其他转录因子,如AP-1/c-Jun、c-Fos、ATF-2等
ERα的膜性成分可作为膜性受体,与G公司蛋白偶联受体家族一起通过第二信使系统发挥转录调控作用。
ERα也是一种有效的非经典 核糖核酸结合蛋白,调控应激反应基因的转录后表达。
ERα信号转导通路的异常与多种肿瘤的发生发展相关,如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌等。
ERα在子宫高表达,卵巢次之,心脏、肝脏、肾脏、大脑、肺相关组织低表达。在雄性或幼龄雌性动物组织中ERα表达量尤其低。
ERα46(3,46 KDa)不仅会在人成骨细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞中表达,还会在结肠癌细胞、乳腺癌细胞等细胞中表达。
阳保健服务MCF-7细胞生长到接触抑制状态时,ERα46会大量表达,超过ERα66(1,66 KDa)
细胞核、细胞质膜、细胞膜。少部分定位于细胞核与内膜之间。
ERα是一种核质穿梭蛋白,在细胞核和细胞质之间快速转运。
人(P03372):1:66 KDa;异构体2:53千达;
计划书3:46KDa;异构体4:36 KDa(预测)
鼠(P19785):67 KDa(预测)
(P06211):67 KDa(预测)
磷酸化
糖基化
双甲基化
棕榈酰化
请注意不同样本中靶标蛋白的表达量存在差异,检测前需要确认靶标蛋白表达量。 建议设置阳性和阴性对照。
WB公司ERα46可能与待检细胞的类型和生长状态有关。因此制样前需确保细胞类型合适,状态正常。
ERα的磷酸化修饰可能需要条件诱导(100ng/ml EGF 5min)因此条件诱导有助于解决信号弱或者无信号现象。
ERα:MCF-7软件
人子宫组织裂解液
大鼠垂体组织裂解液
小鼠大脑组织裂解液
ERα:MDA-MB231标准
人卵巢组织裂解液
大鼠大脑组织裂解液
小鼠肾脏组织裂解液
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
电泳
20微克总蛋白进行电泳。
封闭
英国标准协会5%溶液在室温下封闭膜 温度为4°C