Your browser does not have JavaScript enabled and some parts of this website will not work without it.
为了使您在阿布卡姆官网的浏览体验更顺畅,请使用最新版本的浏览器比如谷歌浏览器
看看我们的BETA网站,看看我们到目前为止做了什么。
搜索和浏览所选产品
通过通常的分销商购买
欢迎光临
你是谁
定制化产品和商务合作加速您的诊断和治疗项目
定制化产品
与我们成为伙伴
获取研究建议和支持
查看支持中心
一步一步完成您的实验
查看协议
活动说明、摘要提交、演讲者、注册方式及更多信息
查看全球活动安排
查看
网络操作系统蛋白分为三个亚型:神经元NOS(nNOS)、iNOS(iNOS)和eNOS(eNOS)
eNOS cGMP介导的信号转导途径参与血管平滑肌松弛,产生一氧化氮(否)不介导血管内皮生长因子(血管内皮生长因子)诱导的冠状血管生成,并通过激活血小板促进血液凝固。
组织表达特异性:电子NOS在血小板、胎盘、肝脏和肾脏中表达。
定位于细胞膜,细胞骨架,高尔基体等。
特别在细胞周期的G2级期与肌动蛋白细胞骨架相关,并与NOSIP公司相互作用,导致酶活性降低。
人(第29474页):我的意思是1:133千Da(预测);异构体eNOS13C和eNOS13B:68 kDa(预测),中国eNOS13G eNOS可靠性
鼠(P70313):132 kDa(预测)
鼠(Q62600):133 kDa(预测)
多个丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化修饰。
肉豆蔻酰化,棕榈酰化修饰。
电子NOS中国人WB预测
电子NOS蛋白预测大小为133 kDa,当60 kDa的剪切体形式,在工作分解结构检测时可能会观察到多条条带现象。
部分细胞系在经过药物刺激处理之后更易检测到eNOS(例如:10µg/ml LPS HepG2)
部分细胞系在经过药物刺激处理之后更易检测到eNOS(磷酸化S1177)(例如:渗透酸;VEGF;HUVEC;PMA;THP1)
在检测磷酸化电子NOS蛋白时,可设置磷酸酶去磷酸化的处理组,以判别磷酸化信号特异性。
eNOS:HUVEC公司全细胞裂解液,EA.hy926型全细胞裂解液,请依据产品说明书选择最合适的阳性对照。
eNOS(磷酸化S1177):HUVEC(VEGF或渗透酸刺激) 全细胞裂解液, THP1(项目管理局刺激) 全细胞裂解液,请依据产品说明书选择最合适的刺激药物。
eNOS:希拉全细胞裂解液。
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
对于磷酸化修饰蛋白添加复合磷酸酶抑制剂,以防止蛋白在提取时被去磷酸化。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
布拉德福德(Bradford)回报分析、劳里(Lowry)回报分析(BCA)分析测定样本总蛋白浓度。
建议使用阳性对照。
电泳
对于分子量较大的靶标蛋白(大于100 kDa),8%的分离胶进行电泳。
20微克总蛋白进行电泳。
转膜
对于分子量较大的靶标蛋白,建议在转膜缓冲液中加入SDS为0.1%
对于分子量较大的靶标蛋白,建议使用0.45μm PVDF
对于分子量较大的靶标蛋白,建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。