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什么是外泌体?
外泌体分离与富集
外泌体鉴定与分析
外泌体功能研究
外泌体是细胞外脂质纳米囊泡,大小约为 30-150纳米在大多数活细胞中通过胞吐作用主动分泌,存在于所有体液中,如血浆、尿液、血清、唾液和脑脊液 (CSF)等
外泌体含有脂质双分子膜结构,携带典型的跨膜蛋白和受体、粘附分子、脂筏相关蛋白、免疫调节分子。在外泌体腔内,可以发现多种蛋白质和核酸,根据不同的细胞类型而不同。
作为细胞间通讯的关键信使,外泌体将生物活性分子传递给受体细胞,从而参与多种病理生理过程,包括肿瘤、心血管疾病和神经退行性疾病等。有一系列研究报道了肿瘤来源的外泌体在肿瘤进展、免疫调节和转移中的预后发挥重要功能。1也有越来越多的证据表明,外泌体可用于早期癌症检测、预后和指导治疗。2
分离外泌体有许多种方法,每种方法都有自己的优点和局限性。但目前没有公认的分离方法,需要根据实验目标来选择三。
外泌体分离的常用方法及比较
通过乳胶免疫微球与抗外泌体表面抗原的抗体共价偶联,捕获总外泌体群体或富集来自特定亚群的外泌体。
产品名称
货号
样品类型
说明
1.0微米免疫球
约288113
血浆、血清、尿液
用于外泌体分离
abcam公司提供总外泌体捕获和定量试剂盒,基于外泌体表面标志物与特异性抗体结合,通过专利的双夹心酶联免疫检测,可对来自少量人体生物体液或细胞培养基的外泌体进行定量和定性分析。
检测方法
种属反应性
整体外显子捕获和定量分析试剂盒
ab287851号
比色法
细胞培养上清
人类
用于细胞培养上清中外泌体的定量及定性分析。
整体外显子捕获和定量分析试剂盒(人血清,比色法)
ab287861磅
血清
用于人血清中外泌体的定量及定性分析。
总外显子捕获和定量ELISA检测试剂盒
约285284
血浆
用于人血浆中外泌体的定量及定性分析。
abcam ExoFACS公司试剂盒可以从细胞培养基中分离外泌体,并通过流式对外泌体进行表征分析。
ExoFACS试剂盒
约287876
流式
操作简便——采用免疫磁珠分离法,将样品与磁珠、检测抗体混合,使用磁座进行简单分离后,加入荧光检测抗体,即可通过流式细胞仪对捕获的外泌体进行分析。
高度灵活——搭配不同的检测抗体即可进行外泌体免疫分型分析。
适用一种或多种样本——细胞培养上清及血浆、尿液等⽣物体液样本均有相应产品适用。
良好的线性关系——可搭配使用外泌体标准品绘制标准曲线,定量结果更准确。
珠
CD326外显子捕获珠
约239688
细胞培养上清、血浆、 尿液
CD9外泌体捕获珠
约239685
CD63外显子捕获珠
约239686
D81外显子捕获珠
ab239687年
试剂盒
外显子分离和分析试剂盒-流式细胞术,细胞培养(CD63/CD9)
约267478
用于分离/检测CD63型阳性的外泌体,
外显子分离和分析试剂盒-流式细胞术,尿液(CD63/CD9)
约267480
尿液
用于分离/检测CD63有效性
外显子分离和分析试剂盒-流式细胞术,血浆(CD9/CD81)
约267479
血浆、血清
用于分离/检测CD9(CD9)阳性的外泌体。
实验对照及绘制标准曲线的最佳选择--abcam公司提供来自健康供体的人血浆、血清、尿液和唾液以及来自不同细胞系的高度纯化的冻干外泌体标准品,可作为实验对照或用于分析校准。
品质优良且稳定--TONTA、流式、电镜等应用验证,品质优良可靠。
应用广泛——适用于不同技术进行蛋白标志物分析、外泌体核酸提取和分析、流式及电镜等分析。
abcam公司也提供荧光标记的外泌体标准品,用于荧光显微镜下的外泌体跟踪。绿色染料可提供稳定的荧光标记,具有持久清晰的信号。
外泌体标准品来源
荧光标记
人血清
约286846
人血浆
约288118
约288123
是
人类尿液
ab286884年
U-87 MG细胞系
约286885
从患者恶性胶质瘤中分离的细胞系
MCF7细胞系
约239691
人乳腺癌细胞系
PC3细胞系
ab239689磅
人转移性前列腺癌细胞系
HT-29细胞系。
ab239690型
人结肠癌细胞系
B16-F10细胞系
约288120
从黑色素瘤小鼠皮肤组织中分离的细胞系
abcam公司外泌体标准品使用超速离心和微孔过滤的组合步骤进行纯化。虽然方法繁琐且耗时,但它能保证外泌体的高纯度。通过微孔过滤和差速离心循环可以大大降低其他微泡的污染。相反,使用化学试剂沉淀外泌体,同时也会沉淀较大的囊泡、蛋白质复合体、蛋白质-核糖核酸复合体等,导致样品纯度较低。冻干的形式还方便标准品的长期储存。
特点
abcam公司
外泌体标准品
某公司
外泌体标准体
每管的样品量
100微克
50微克
分离方法
超速离心和微孔过滤
沉淀试剂
纳米粒子/mL(50ug人血清外泌体)
3.75x10^10磅/毫升
2.29x10^9磅/毫升
最终形式
冻干(冻干)
冻结
存储温度
4°C(模式)
-20摄氏度
保质期
3年
1年
外泌体分离和定量完成后,需要对外泌体进行鉴定。根据国际细胞外囊泡研究协会(ISEV)针对囊泡研究提出的MISEV2018(南韩)(定义细胞外囊泡及功能的最低实验要求)细胞外囊泡(电动汽车含外泌体)鉴定主要分为总体表征和个体表征两部分4:
蛋白鉴定建议用西部印记或流式细胞术对阳性标志物和阴性标志物进行表征。要求至少包括1 个跨膜蛋白和1 个细胞溶质蛋白、1个阴性蛋白质标志物。
粒径分析:应用动态光散射(DLS)或纳米颗粒跟踪分析(NTA)方法,对粒径分布进行分析。
形态表征:应用透射电子显微镜(透射电镜)或原子力显微镜(AFM)电动汽车的形态及粒径进行表征。
abcam公司提供高特异性、高灵敏度的外泌体标志物抗体。
靶标
克隆号
应用
靶点说明
备注
组合(Calnexin、CD9、CD63、CD81、Hsp70、TSG101)
约275018
-
Calnexin公司
ab133615型
EPR3633(2)
流动周期(内部)、WB、IHC-P
鼠女士、胡女士
阴性标志物,ER膜标记
敲除验证
CD9(CD9)
约263019
EPR23105-125型
IP、WB、IHC-P、Flow Cyt
胡
跨膜蛋白
约286172
A1501型
WB、ELISA、IHC-Fr、IP
CD63型
ab134045号
EPR5702(电子顺磁共振5702)
WB、IHC-P
CD81型
澳大利亚银行109201
EPR4244型
工作分解结构
约286173
A1504型
WB、ELISA、流式细胞仪
热休克蛋白70
约181606
EPR16892型
流动周期(内部)、IHC-P、WB、ICC/IF
分子伴侣蛋白
TSG101型
ab125011型
EPR7130(B)
电子顺磁共振成像复合体相关蛋白
种属说明:Hu(人类)、Ms(老鼠)
敲除验证:该标记表示abcam公司以基因敲除细胞系做为阴性对照,对该产品进行了敲除验证,以确认抗体对目标蛋白的特异性。
abcam公司提供高质量的肿瘤相关外泌体蛋白标志物抗体,可用于胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、恶性胶质瘤、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、胆管癌等研究。点此下载《液体活检解决方案》,获取完整肿瘤相关外泌体蛋白标志物及抗体列表。
1.Ayuko Hoshino、Han Sang Kim等。细胞外囊泡和颗粒生物标记物定义多种人类癌症。单元格。2020年8月20日;182(4):1044–1061.e18。
2.陈IH,薛L等。细胞外囊泡中的磷蛋白作为乳腺癌的候选标记物。程序。国家。阿卡德。科学。美国2017年114、3175–3180。
三。李世玉, 明毅(Ming Yi)等。。外泌体在液体活检中对癌症诊断和预后预测的作用。国际癌症杂志.2021年6月1日;148(11): 2640–2651.
4.Clotilde Théry、Kenneth W Witwer等。2018年细胞外囊泡研究的最低信息(MISEV2018):国际细胞外囊液学会的立场声明和MISEV2004指南的更新。J细胞外囊泡2018年11月23日;7(1):1535750.
5陶晃和邓楚霞Exosomes作为癌症诊断和预后生物标志物的最新进展。国际生物科学杂志. 2019; 15(1): 1–11.
6.Bradbury A和Pluckthun A。再现性:标准化研究中使用的抗体。 自然。 518:27-29 (2015).
7台式科学。【2020年6月15日访问】(2020年)
8Zhong Z、Sassi M、Heaton S、Koch S、De Block G、Conlon D、Lochead J、Dreja H、Munro M、Solache A、Hamilton B。大规模使用敲除验证来确认抗体特异性。 免疫学杂志200(补编1)120.18(2018)。