利用工程成核特性提高蛋白质结晶试验的生产率

蛋白质结晶中的成核前体

综述了蛋白质晶核形成的介观富蛋白簇的性质。集群人口从10个^-7到10^-3溶液体积的百分比；簇半径约为100nm；簇的存在是由于瞬时低聚物的形成，对于某些蛋白质来说，这可能是由于构象的灵活性。

浓度＜0.5%的共价结合荧光探针的存在不会影响大分子结晶筛选实验的结果。此外，荧光可用于确定新的、不立即显现的铅结晶条件。

研究了激光辐照对新制备的蛋白滴的影响，发现这是一种可行的诱导成核的工具。在我们的实验中，筛选过程中的正结晶点击数增加了。在某些情况下，激光曝光后，晶体生长速度、晶体尺寸和X射线衍射分辨率都有显著提高。在优化的激光设置下，在任何情况下，激光都不会对晶体生长有害。

结晶实验中细胞核的形成需要蛋白质分子的相互作用，直到形成临界尺寸的聚集物。这种核的形成可以在蛋白质浓度很高或饱和度较低的情况下通过引入种子来形成核位置。将此播种步骤纳入自动筛选过程可能会对产生晶体的条件数量产生相当大的影响。本文给出了一些初步结果。

通过缓冲液优化增加蛋白质的溶解度，并将甘油添加到高于标准色谱缓冲液中的值，从而显著改善结晶筛选结果。缓冲液中溶解度的估算为成功筛选提供了一种选择初始蛋白质浓度的方法。

一种提高蛋白质结晶中所用液滴稳定性的简单方法，其特征在于液滴的大小和组成。该方法可以改善结晶结果，简化结晶设备。

本文重点介绍了通过在试验中使用油来提高凝胶在蛋白质结晶中的使用的两种不同方法。

与晶体成核竞争的并行聚集途径通过有序形成小分子寡聚物和亚稳态簇耗尽可溶性蛋白质的浓度。非横向聚集体也有利于异质成核，从而对蛋白质结晶产生积极影响。

搜索IUCr日志		国防部		高级搜索
作者		体积	第页