血红蛋白（Hb）的变构氧结合是基于氧合态和脱氧态的晶体结构所阐明的四元结构变化而广泛讨论的。然而，在没有对Hb分子进行任何人工修饰的情况下，氧和脱氧形式之间中间状态的结构仍有待确定。作为一种管状虫，温州沼虾具有分子量约为400和3600 kDa的细胞外巨血红蛋白。最近，我们测定了400 kDa Hb（V2Hb）在氧状态下的晶体结构，然后通过浸泡方法成功地从氧晶体中获得了V2Hb的脱氧晶体[1]。这些发现鼓励我们开始对V2Hb的氧和脱氧形式之间的中间状态进行结构研究，这应能更准确地理解Hb的变构机制。V2Hb的脱氧晶体是通过在含有50 mM连二亚硫酸钠的溶液中浸泡从氧晶体中获得的，并培养几分钟。我们测试了不同的浸泡时间，从3秒到180秒，然后立即在氮气流下闪速冷冻。获得的结构表明，在浸泡时间大于10 s的情况下，一些血红素囊（氧结合位点）处氧分子的电子密度很弱或消失。这些“中间”结构显示出与氧结构几乎相同的四级结构。这一事实表明，V2Hb的四元重排可能发生在所有氧分子与所有亚单位完全分离之前。
