近年来，二次谐波（SHG）显微镜已成为结构生物学领域检测蛋白质晶体的有用工具。倍频，即光的倍频，是一种特定于缺乏反转中心的晶体介质的过程。通过理论模型和实验数据，估计约84%的已知蛋白质晶体结构使用当前的SHG显微镜仪器可以检测到SHG信号。扩大这一覆盖范围对结构生物学家极为有用，他们定期筛选整个96孔板，数百种结晶条件，以寻找衍射质量的蛋白质晶体。研究了一系列SHG活性染料，包括孔雀石绿（MG）和反式-4-[4-（二甲氨基）苯乙烯基]-1-甲基吡啶碘化物（DMI），以评估它们在具有不同固有SHG活性的广泛蛋白质晶体上增强非线性光学（NLO）响应的能力。MG和DMI被证明可以增强四方（P43212）溶菌酶晶体的SHG活性，这种蛋白质通常很少或没有SHG信号。通过插入MG和DMI，分别实现了约16000倍和20倍溶菌酶的SHG增强。这些结果与基于两种染料对称性和结构差异的预测一致。在结晶孔中加入MG染料后，用溶菌酶晶体的SHG延时图像研究染料嵌入和吸收的动力学。动力学结果表明，在接触染料的几分钟内，SHG活性很容易明显增加。这些结果表明，在提高蛋白质晶体检测的SHG显微镜覆盖率方面取得了重大进展。
