大多数介导细胞途径中关键步骤的蛋白质相互作用是暂时的，因此很难用结构方法捕捉。酿酒酵母的一个例子是检查点效应器Rad53激酶和复制起始Dbf4-Cdc7激酶之间的相互作用。Dbf4是该激酶的调节亚单位，Cdc7是其催化亚单位，在激活复制源中发挥作用。当复制分叉损坏时，检查点响应会激活Rad53，该Rad53会暂时但具体地绑定到Dbf4，而这反过来会抑制Dbf4-Cdc7的活动。这种相互作用的结果阻止了复制应激期间晚期起源的激活。我们的实验室已广泛表征了Dbf4-Rad53相互作用，从而提供了一个极好的系统来探索稳定弱蛋白复合物的新方法。Rad53的N末端叉头相关（FHA）域介导与Dbf4的BRCA-1 C末端（BRCT）域的相互作用。FHA域和BRCT域是模域，其中N端和C端位于同一个面上。因此，我们决定使用不同长度的连接子来连接这两种蛋白质，以稳定Dbf4-Rad53复合物。我们生成了四种不同的Dbf4-linker-Rad53融合体，并用小角度X射线散射对其进行了生物化学和结构表征。其中只有一种融合体产生了适合于晶体分析的晶体，我们通过分子替换解决了结构问题。非对称单元中的四个融合副本显示出相同的Dbf4-Rad53界面，这与之前描述Dbf4-Rad53相互作用的研究一致。重要的是，晶体结构中的相互作用发生在分子间而非分子内，这表明连接物增加了局部蛋白质浓度，但不会强制形成复合物。从更广泛的意义上讲，我们的工作揭示了可用于设计连接子以捕获弱蛋白复合物的一般趋势。
