非包膜病毒的脱膜

包膜病毒与宿主膜融合而不影响细胞完整性。非包膜病毒和细菌通过破坏内胚体膜而渗透，从而使来自内胚体腔的复合型碳水化合物暴露于细胞溶质蛋白中。在这里，我们报告了由传入的腺病毒种类B/C在HeLa细胞中触发的半乳糖凝集素-3（Gal3）阳性膜的动力学和初始标记物分析。利用mCherry-Gal3报告子构建物、免疫标记、共焦和电子显微镜，我们检测到感染后1小时内含有Gal3的早期内胚体抗原1阳性膜的稳健信号。腺病毒以15分钟pi的高效率从非酸性内体中渗透，并且其数量大大超过了Gal3阳性膜，这表明Gal3向断裂膜的补充是暂时的，或者Gal3阳膜迅速翻转。为了支持快速转变，在单膜囊泡和降解自噬体中发现了Gal3。Gal3膜含有泛素和多-泛素结合蛋白p62/固碳体-1，但只有少量病毒或病毒暴露的膜裂解蛋白VI。值得注意的是，Gal3阳性膜的清除时间为3小时pi，慢于蛋白质VI的清除时间30分钟pi。数据表明，破碎的早期内体，而不是病毒颗粒，通过一个涉及自噬的过程迅速被清除，我们称之为“内吞”。我们推测，内吞是前病毒性的，会减弱先天免疫。

非洲猪瘟病毒（ASFV）是猪生产的主要威胁，自2007年首次在高加索地区出现以来，该病毒一直在东欧缓慢传播。ASFV通过内吞作用进入细胞，获得胞浆，开始从晚期内体和多泡体复制。与低密度脂蛋白相关的胆固醇通过内吞进入细胞也遵循与ASFV类似的转运途径。在这里，我们表明胆固醇在病毒通过内吞途径传播时，在感染的建立中起着重要作用。与其他DNA病毒（如痘苗病毒或腺病毒5）的情况不同，ASFV释放/进入胞浆需要胆固醇从内体流出。胆固醇在内体中的积累会破坏融合，导致病毒粒子滞留在内体内。ASFV还通过增加细胞摄取来重塑细胞内胆固醇，并将游离胆固醇重新分配到病毒复制部位。我们的分析表明，ASFV控制胆固醇动力学，以确保适当的脂质流动，从而建立生产性感染。重要性自2007年在高加索地区出现以来，非洲猪瘟一直向西传播到欧洲邻国，威胁着猪的生产。由于缺乏有效的疫苗，ASF的控制依赖于早期诊断和广泛扑杀感染动物。我们调查了ASFV感染的早期阶段，以确定对ASF进行治疗干预的潜在细胞靶点。病毒通过内吞作用进入细胞，随后不久，在晚期内体的酸性pH值中发生病毒脱毒。我们发现ASFV感染需要并重组细胞脂质胆固醇。ASFV需要胆固醇离开内体才能进入细胞质以建立生产性复制。我们的结果表明，与ASFV相比，痘苗病毒或腺病毒5对胆固醇流出有不同的需求。

腺病毒基因组的核传递需要衣壳穿过内吞室的限制膜并穿过胞浆到达细胞核。这种内体逃逸在内化时启动，涉及进入衣壳的部分分解的高度协调过程，以释放膜裂解的内衣壳蛋白VI。使用野生型和蛋白VI突变的人类腺病毒血清型5（HAdV-C5），我们表明，衣壳稳定性和膜破裂是传入腺病毒进入相关分类的主要决定因素。此外，通过使用电子冷冻显微镜以及戊子和蛋白质VI特异性抗体，我们表明蛋白质VI的两亲螺旋通过防止戊子和蛋白VI的过早分解和部署，有助于衣壳的稳定性。因此，螺旋具有双重功能，通过防止衣壳过早分解和介导有效的膜裂解来避免溶酶体靶向，从而维持衣壳的亚稳态。基于这些发现和低温电子显微镜的结构数据，我们提出了一种改进的进入拆卸机制。重要的是，在这项研究中，我们显示了腺病毒颗粒稳定性与内质体逃逸所需的膜裂解衣壳蛋白VI的进入依赖性释放之间的复杂联系。我们表明，腺病毒内部蛋白VI的两亲螺旋需要稳定颗粒中的戊子，同时与进入时的戊子释放相一致，并且蛋白VI的释放介导膜裂解，从而阻止溶酶体分选。我们认为，蛋白质VI的这种双重功能通过平衡成熟腺病毒颗粒的亚稳态确保了最佳的拆卸过程。腺病毒（AdV）是一种无包膜的双链DNA病毒，在繁殖性感染细胞的细胞核中聚集，在感染周期结束时释放到细胞外环境中。新细胞的生产性感染需要衣壳在进入时遵循一个逐步的拆卸过程，如果完美地执行，将导致高效的基因组转移到细胞核（1,2）。AdV病毒粒子由13种不同的多肽组成，形成一个二十面体衣壳，包围含有基因组的病毒核心。衣壳主要由构成衣壳侧面的三聚六角体组成。戊子和纤维位于12个顶点中的每一个，它们在那里形成一个戊基戊基，三聚纤维分子从中伸长（3-5）。此外，衣壳通过粘固蛋白IIIa、VI、VIII和IX稳定。衣壳包围病毒核心，病毒基因组通过与主要核心蛋白VII和蛋白V、X、TP和IVa2结合而组织成染色质（3-5）。在衣壳组装后（或伴随衣壳组装），一些病毒蛋白通过病毒结合腺病毒蛋白酶（AVP）进行蛋白水解处理（6）。病毒成熟的这个过程对病毒的产生至关重要。。。