MHC H-2K的复合组装、结晶和初步X射线晶体学研究^d日与HBV核心九肽复合

MHC I类（MHC I）-限制性病毒特异性CTL被认为是控制这种自然发生的慢病毒和对马成功应用马传染性贫血弱毒疫苗的保护性免疫反应的关键成分。然而，马MHC I如何呈现表位肽的结构基础尚不清楚。在本研究中，我们通过重折叠重组分子的能力和热稳定性研究了几种马传染性贫血病毒衍生表位肽的结合，然后通过测定五种肽MHC I复合物的x射线结构：马MHC I类等位基因（Eqca）-N*00602/Env-RW12、Eqca-N*00602/Gag-GW12、，Eqca-N*00602/修订版QW11、Eqca-N*00602/Gag-CF9和Eqca.N*00601/Gag-GW12。虽然Eqca-N*00601和Eqca-N*00602在单个氨基酸上存在差异，但当结合类似的CTL表位Gag-GW12时，Eqca.N*00601呈现出截然不同的肽呈现；结果表明，之前报道的功能在这两个等位基因之间是非交叉识别的。结构加上与9肽络合的Eqca-N*00602特别值得注意，因为我们说明了与Env-RW12相比，Gag-GW12络合物表位肽中心的表位肽的表观灵活性存在差异，并且严格选择了正常长度的表位肽类。马MHC I分子对长肽的特征性偏好和非常规表达为解释马的特殊抗慢病毒免疫提供了结构基础。我们认为，有益的参考点可以作为其他人类或动物慢病毒的初始平台。

主要组织相容性复合体（MHC）与许多疾病有遗传关联，通常是由于多形MHC分子向免疫系统T淋巴细胞呈现抗原肽的差异。在鸡中，由于与抗原呈递相关的多态性转运体（TAP）共同进化，每个MHC单倍型中只有一个经典的I类分子表达良好，这意味着对感染性病原体的耐药性和敏感性特别容易观察到。以前，来自B21单倍型的鸡MHCⅠ类分子BF2*2101的结构显示出一个异常大的肽结合槽，可容纳广泛的肽作为细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的表位，解释了MHC决定的B21鸡对马立克氏病的抗性。在这里，我们报告了B4（也称为B13）单倍型的BF2*0401的晶体结构，显示出迄今为止在其他MHC分子中未发现的高正电荷表面，以及由于具有粗大侧链的等位基因特异性残基而导致的非常窄的凹槽。总之，这些特性限制了能够结合这种I类分子的表位肽的数量。然而，肽结合分析表明，体外BF2*0401可以结合比B4细胞表面发现的更多种类的肽。因此，结合多态性TAP转运体和MHC的特异性，可以将一组非常有限的带有负电荷锚定的BF2*0401肽提供给T淋巴细胞。

严重急性呼吸系统综合征（SARS）是2002年11月在中国出现的一种高度传染性和威胁生命的疾病。一种新型SARS相关冠状病毒被确定为其主要病原体；然而，SARS的免疫发病机制以及特殊CTL在病毒清除中的作用在很大程度上仍不明确。在本研究中，从在线数据库中选择潜在的HLA-A*0201限制性刺突（S）和核衣壳蛋白衍生肽，并通过体外重折叠和T2细胞稳定分析筛选潜在的CTL表位。用IFN-γELISPOT试验评估九种可与HLA-A*0201分子重折叠的肽的抗原性，以确定刺激HLA-A2+SARS恢复供体PBMC CTL的能力。从S蛋白中鉴定出一个新的HLA-A*0201-限制性十聚表位P15（S411-420，KLPDDFMGCV），并发现其位于S1结构域的血管紧张素转换酶2受体结合区。P15可显著增强T2细胞表面HLA-A*0201分子的表达，刺激SARS患者PBMC产生IFN-γ的CTL，并在体内诱导P15免疫HLA-A2.1转基因小鼠产生特异性CTL。此外，通过编码S蛋白的DNA疫苗免疫HLA-A2.1转基因小鼠，可诱导显著的P15特异性CTL；表明P15是一个自然处理的表位。因此，P15可能是一种新的SARS相关冠状病毒特异性CTL表位，是表征病毒控制机制和评估候选SARS疫苗的潜在靶点。