体细胞超突变（SHM）和类开关重组（CSR）是由激活诱导的胞苷脱氨酶介导的免疫球蛋白基因的胞苷脱氨化引发的。MutS同源物（Msh）2-/-小鼠减少了A-T突变和CSR。这表明Msh2可能在修复激活诱导的胞苷脱氨酶生成的G-U错配中发挥作用。然而，由于Msh2不仅启动错配修复，而且还具有其他功能，如凋亡信号，因此尚不清楚Msh2的哪种活性对观察到的效应负责，因此，已经提出了许多模型。为了进一步分析Msh2在SHM和CSR中的作用，对Msh2基因中具有“敲除”突变的小鼠进行了检测，该突变使腺苷三磷酸酶结构域失活。这种突变（即Msh2G674A）不影响凋亡信号，允许识别错配，但阻止Msh2启动错配修复。这里，我们表明，与Msh2-/-小鼠类似，Msh2G674A小鼠的SHM偏向于G-C突变。然而，CSR部分减少，开关连接与染色体分离后2-/-小鼠的开关连接比Msh2-/-鼠的开关连接更相似。这些结果表明，A-T突变需要Msh2腺苷三磷酸酶活性，并表明Msh2在CSR中具有不止一个作用。

微卫星标记是哺乳动物基因组中的简单序列重复，可用于识别疾病位点、定位感兴趣的基因以及研究与减数分裂不分离相关的分离模式。不同品系的小鼠具有不同的CA重复序列长度，可以使用基于PCR的方法来识别它们，从而可以指定特定的基因型。分子基因分型可以在任何发育阶段提供这种鉴定，从而可以研究广泛的异常现象。我们利用分子基因分型研究了早孕小鼠胚胎染色体分离与不分离的关系。在我们的分析中获得了有关亲本起源以及给定子代携带的染色体数量的信息。

我们开发了一种培养系统，用于将人类胚胎干细胞（HESC）高效定向分化为神经前体细胞和神经元。HESC通过人工传代维持，并在类胚体分化之前分化为形态上不同的OCT-4+/SSEA-4单层细胞类型。胚胎体在无血清条件下悬浮生长，存在来自人类肝癌细胞系HepG2（MedII）的50%条件培养基。

已知刺激C纤维感觉神经元可激活脊髓后角的ERK-MAP激酶信号通路。在本研究中，我们阐明了负责ERK激活的C纤维传输的一些信号成分。使用小鼠脊髓背角的体外切片制备，我们比较了突触后神经元中P物质（SP）和BDNF的释放与ERK的激活。我们观察到，初级传入刺激募集C纤维是突触后背角神经元释放SP和BDNF以及激活ERK所必需的。通过NMDA和mGluR1而非AMPA受体传递谷氨酸对ERK的激活至关重要。通过TrkB受体的BDNF信号而非通过NK（1）的SP信号也参与ERK募集。总之，谷氨酸和BDNF是背角神经元ERK激活的重要C纤维信号成分。

乳腺的发育和分化受多种生长因子和激素的调节。乳蛋白基因的表达是功能性乳腺上皮分化的标志，由泌乳激素催乳素和糖皮质激素协调。迄今为止，很少有人描述过由产乳激素转录激活的“早期反应”基因。我们使用代表性差异分析（RDA）在SCp2小鼠乳腺上皮细胞中搜索致乳反应基因。其中一个cDNA编码DNA结合蛋白Taxreb107，最初被鉴定为HTLV-I Tax应答元件结合蛋白。催乳素和地塞米松诱导SCp2和HC11乳腺上皮细胞分化后，紫杉醇107表达增加。小鼠乳腺中Taxreb107 RNA水平受发育调控，在妊娠中期和晚期，其水平显著增加，并在哺乳期持续存在。在HC11乳腺上皮细胞中过度表达反义Taxreb107 cDNA构建物或反义寡核苷酸会减弱催乳素和地塞米松治疗后乳蛋白基因的表达。这些发现表明Taxreb107在乳腺分化过程中作为一个催乳激素反应基因发挥作用。

在本报告中，我们比较和对比了之前发表的三种贝叶斯方法，用于从人群样本中的基因型数据推断单倍型。我们回顾了这些方法，强调了它们之间在使用的模型（“先验”）和使用的计算策略方面的差异。我们引入了一种新的算法，将一种方法的建模策略与另一种方法中的计算策略相结合。在使用真实数据和模拟数据的比较中，此新算法优于所有三种现有方法。新算法包含在在线提供的2.0版软件包PHASE中(http://www.stat.washington.edu/stephens/software.html).

通过调节蛋白质磷酸化/去磷酸化来调节细胞过程是生物体中大量过程的基础。这些过程是由特定的蛋白激酶和磷酸酶进行的。在本研究中，克隆了结核分枝杆菌先前未标记的基因（Rv0018c），命名为结核分枝杆菌Ser/Thr磷酸酶（mstp），在大肠杆菌中表达，并纯化为组氨酸标记蛋白。纯化蛋白（Mstp）对髓磷脂碱性蛋白（MBP）、组蛋白和酪蛋白的磷酸化Ser/Thr残基进行去磷酸化，但未能对这些底物的磷酸化酪氨酸残基进行脱磷酸化，表明该磷酸酶对Ser/Thr残留物具有特异性。有人认为mstp是基因簇的一部分，该基因簇还包括两种Ser/Thr激酶pknA和pknB。我们发现，Mstp是一种跨膜蛋白，可对磷酸化的PknA和PknB进行去磷酸化。Southern blot分析显示，快速生长的腐生菌耻垢分枝杆菌和偶发分枝杆菌中没有mstp。PknA已被证明，而PknB已被提议在细胞分裂中发挥作用。mstp在生长缓慢的分枝杆菌中的存在、其跨膜定位以及磷酸化PknA和PknB去磷酸化的能力表明，mstp可能在调节结核分枝杆菌的细胞分裂中发挥作用。

有证据表明吗啡对细胞增殖有影响，关节内吗啡对慢性关节炎具有镇痛和抗炎作用。阿片类药物的作用是通过影响cAMP通路的G蛋白偶联受体介导的。我们证明，人类骨关节炎软骨和培养的软骨细胞具有mu-opioid受体。免疫检测、聚合酶链反应和Western印迹显示受体的存在。β-内啡肽刺激软骨细胞导致转录因子cAMP反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化降低。纳曲酮逆转了这种作用。所获得的结果表明，在人类关节软骨细胞中，阿片类药物通过μ阿片受体影响转录因子CREB，进而导致基因表达的随后变化。

白细胞介素（IL）-8是中性粒细胞的主要化学吸引剂，也被认为会影响癌症的进展。在本研究中，我们发现IGF-I刺激白血病细胞株HL-60中IL-8 mRNA的表达和IL-8的分泌。两种丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激酶（MEK）抑制剂（磷酸化MAPK的细胞外调节激酶（ERK）1和ERK2）以及c-Jun NH2-末端激酶（JNK）抑制剂SP600125可完全减弱IL-8表达的刺激。相反，p38 MAPK和磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）抑制剂并没有消除IGF-I的作用。我们还表明IGF-I刺激ERK1和ERK2的激活，但我们没有检测到IGF-I对p38、JNK（p46）或JNK的磷酸化有任何影响。总之，我们的结果表明，在HL-60细胞中，IGF-I上调IL-8需要基础JNK活性和MEK-ERK通路的激活。

脑内注射下视黄素-1（hcrt-1）已被证明能引发交感神经兴奋反应。然而，可能介导这些心血管效应的中心部位的位置尚未明确阐明。本研究在雄性Wistar大鼠身上进行，旨在研究头侧延髓腹内侧区（RVMM）微量注射hcrt-1对平均动脉压（MAP）、心率（HR）和动脉压力反射的影响。最初进行了一系列实验，以提供RVMM区域hcrt-1和hcrt-1受体（hcrtR-1）样免疫反应（i.r.）的详细定位。Hcrt-1和hcrtR-1 ir在RVMM区域均有发现，但主要在大细胞网状核和邻近的巨细胞旁外侧核内。在第二个系列中，对含有hcrt-1和hcrtR-1 ir的区域进行了探索，以寻找引起麻醉大鼠MAP和HR变化的部位。在大细胞网状核区域微量注射hcrt-1（0.5-2.5 pmol）可引起HR的剂量依赖性增加，MAP几乎不变。静脉注射毒蕈碱受体拮抗剂甲基溴化阿托品可显著减弱（约62%）HR反应，而完全自主神经阻滞可消除HR反应。最后，在大细胞网状核内单侧或双侧微量注射hcrt-1可显著减弱压力反射激活引起的反射性心动过缓，而静脉注射苯肾上腺素后MAP增加。这些数据表明，RVMM区域的hcrt-1激活神经元回路，抑制迷走神经活动，增加心脏交感神经活动，并改变反射性控制循环的中枢回路的兴奋性。

促炎细胞因子在急性应激源暴露反应中的作用最近受到关注。暴露于一次不可避免的休克（IS）可诱导外周和中枢促炎细胞因子。其他应激因素也会增加各种组织中促炎细胞因子mRNA和/或蛋白的表达。然而，应激源对中枢和外周促炎性细胞因子的诱导仍存在争议，而且不同应激源的细胞因子诱导模式并不一致。本实验试图检测已知引起IL-1β蛋白升高的应激源的促炎细胞因子反应模式。IS后检测了三种促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6以及IL-1β蛋白的mRNA表达。IS增加了下丘脑、海马、垂体和脾脏等多种组织中IL-1βmRNA和/或蛋白的表达。此外，IS同时改变下丘脑和脾脏中的IL-1βmRNA和蛋白，而垂体中IL-1β的mRNA增加滞后于IL-1β蛋白的增加。有趣的是，is后4h海马中IL-1βmRNA升高，但海马中IL-1beta蛋白未检测到升高。TNF-α和IL-6 mRNA的表达并没有随着IS的反应而增加。事实上，IS后即刻皮质、垂体和肝脏中TNF-alpha mRNA表达降低。这些发现表明应激源，尤其是IS对促炎细胞因子表达的改变具有区域和细胞因子特异性。

背景：苯乙烯吡喃酮衍生物（SPD）是从Goniothalamus sp.中提取的一种植物源性药理活性化合物。此前，我们曾报道过SPD通过诱导凋亡细胞死亡抑制MCF-7人乳腺癌细胞的增殖，而对非恶性细胞的影响最小。在这里，我们试图进一步阐明社民党的行动方式。结果：我们发现，随着胞浆细胞色素c的积累和启动子caspase-9的处理，内在凋亡途径被激活。未检测到蛋白酶-8的裂解产物。接下来，执行者caspase-7被切割并激活，以响应SPD治疗。为了证实caspase-7激活后诱导了细胞凋亡，使用了caspase抑制剂Ac-DEVD-CHO。用该抑制剂预孵育细胞将SPD处理的细胞中的凋亡水平和胱天蛋白酶-7活性逆转至未处理的水平。结论：总之，这些结果表明SPD通过以胱天蛋白酶-7依赖的方式诱导细胞凋亡，是MCF-7细胞的有效抗增殖剂。

人类sirtuin 3（SIRT3）基因编码一种推测的线粒体NAD依赖性脱乙酰酶（SIRT2），属于sirtuin-2蛋白的进化保守家族。在模型生物中的研究表明，SIR2基因控制寿命，但没有关于SIRT3在人类寿命中可能作用的数据。通过分析与SIRT3的G477T标记相关的基因型特异性生存功能，我们发现男性TT基因型增加（p=0.0272），而老年人GT基因型减少（p=0.0391）。由于SIRT3位于染色体区域（11p15.5），其中有四个可能与寿命相关的基因（HRAS1、胰岛素样生长因子2、胰岛素原和酪氨酸羟化酶），我们测试了G477T等位基因和上述基因的等位基因之间的链接不平衡。这种不平衡在任何情况下都不显著，因此表明SIRT3本身或与SIRT3密切相关的基因可能与人类寿命有关。

中枢阿片和催产素系统参与钠摄入量的调节控制。此外，先前的研究支持阿片肽和催产素途径之间存在功能性相互作用，并表明β-内啡肽神经元会调节中枢催产素通路的活性、垂体分泌和钠摄入量。为了研究这种阿片肽在控制催产素（OT）合成和钠食欲调节中的作用，我们使用了大脑β-内啡肽含量存在基因剂量依赖性变化的小鼠，其表达量为正常β-内啡肽含量的100%、50%或0%。我们的结果表明，与野生型小鼠（WT）相比，在速尿和低钠饮食治疗后，β-内啡肽敲除（KO）和杂合（HT）突变小鼠消耗约50%的2%氯化钠溶液。这些数据表明，β-内啡肽可能促进诱导的钠食欲，为β-内黄素在钠食欲行为中的作用提供了新的证据。我们的数据还表明，诱导摄入钠后，通过原位杂交评估的WT动物下丘脑室旁核内OT mRNA水平显著增加，这支持了先前的证据，表明中枢OT在控制钠摄入量方面具有抑制作用。此外，与WT小鼠相比，β-内啡肽突变小鼠在不同条件下（基础、对照或实验）的OT mRNA表达水平类似于较高水平。对照HT和KO小鼠的OT mRNA表达水平均高于对照WT组，且诱导钠摄入量后这些水平没有变化。总之，我们的数据表明，在β-内啡肽缺乏小鼠中观察到的钠摄入量减少可能是由于OT基因的高表达所致。这一结论将支持OT抑制钠摄入的假设，并为β-内啡肽调节OT合成和钠食欲提供新证据。

脑源性神经营养因子（BDNF）似乎既受癫痫发生的调节，又是癫痫发生的调节剂。在连续8天以上暴露于氟氯乙烷试验的点燃小鼠的氟氯乙醚（HFE）模型中，普遍发作阈值快速、持久降低，发作表型的变化较慢，这是对随后暴露于氟氟乙烷的反应。特定小鼠菌株的BDNF基因型似乎会影响该模型中的致痫进展。因此，我们假设氟硫醚诱导的癫痫发作会改变BDNF的信号通路。HFE点燃后，完全点燃（8次癫痫发作）的成年雄性C57BI/6J小鼠在最后一次癫痫发作后至少28天内，全脑BDNF水平显著升高。仅发作四次HFE（未点燃）的小鼠BDNF水平升高，但仅在发作后1天（DPSz）升高，而在研究的任何时间点，仅发作一次HFE的小鼠BDNF水平没有显著改变。在接受四次HFE发作的小鼠中，海马、下丘脑和额叶皮质BDNF的区域表达模式也因一个DPSz而升高，并因14DPSz恢复到对照值。小脑、纹状体或梨状皮质未见变化。相反，完全点燃的小鼠海马、下丘脑、新皮质和纹状体中的BDNF水平显著升高，至少在14DPSz时仍保持升高，而小脑和梨状皮质中的BDNF水平保持不变。区域结果用抗BDNF免疫组织化学（IHC）证实。尽管HFE点燃后BDNF水平发生变化，但我们无法证明全长酪氨酸激酶受体B（TrkB）表达（Western blot和IHC）或截断的TrkB（IHC。总之，这些数据表明存在一个正反馈回路模型，该模型涉及癫痫发作活动和发作次数以及持续修改的BDNF信号通路，该通路影响HFE点燃范式中的发作表型。因此，BDNF的长期升高可能是致痫过程和人类难治性癫痫发生的部分原因。

我们研究了促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）对12-18天龄大鼠脊髓切片（用电压敏感染料染色）胶状质（第二层）中光学记录的神经元活动可塑性的影响。对激活A和C纤维的背根进行单脉冲测试刺激，在II层膜中引起长时间（>100 ms）的光吸收变化。该响应表示所有元件沿切片深度的总膜电位变化。在条件反射高频刺激A纤维激活强度后，测试刺激诱发的神经元活动较少[-27+/-1%（7），（平均+/-SE（n）），条件反射后45-60分钟时P<0.01（*）]。当在预处理过程中使用CRF（1 microM，10 min）时，神经元活动被促进而非抑制[+20+/-3%（5），P<0.05]。单独CRF表现出不显著的效果[-5+/-1%（4），P=0.2]。相反，在灌流液中存在抑制性氨基酸拮抗剂荷包牡丹碱（1μM）和士的宁（0.3μM）的情况下，条件作用促进了其[+27+/-1%（12）*]，条件作用期间的CRF治疗抑制了促进作用，并呈剂量依赖性[0.1μM:+18+/-2%（5）*，1μM:+1 3+/-1%（7）*]。尽管神经元间的活动可能起作用，但这些结果表明，根据细胞条件，CRF可能对第二层膜内的兴奋性突触传递具有双重作用：从诱导长期抑制转变为长期增强（LTP），以及抑制LTP诱导。由于LTP被认为至少部分地对持续性疼痛负责，CRF可以调节诱导。

结合荧光相关光谱（TIR-FCS）使用的全内反射激发是一种表征平面衬底和溶液界面附近或处荧光分子的动态行为和绝对浓度的方法。在这项工作中，我们首次证明了TIR-FCS用于检测荧光配体在溶液中的相互作用动力学，这些荧光配体与底物支撑的平面膜中的受体特异而可逆地结合。获得了与小鼠受体FcgammaRII可逆结合的荧光标记IgG的荧光涨落自相关函数，该IgG被纯化并重组为底物支撑的平面膜。数据是IgG溶液浓度、Fc受体表面密度、观察区域大小和入射强度的函数。自相关函数与适当的理论形式的最佳拟合给出了结合IgG的平均表面密度、IgG局部溶液浓度、表面离解的动力学速率常数以及通过倏逝场深度的扩散速率。观察到的荧光分子的平均数量，无论是在溶液中还是在表面上，都按照预期的IgG溶液浓度、观察区域大小和Fc受体表面密度进行缩放。离解速率常数和通过倏逝场的扩散速率与以前的结果一致，所有测量参数都与入射强度无关。

AP-1B网格蛋白适配器复合体在上皮细胞基底外侧表面的许多膜蛋白的识别和细胞内转运中起着关键作用。然而，对与AP-1B协同作用的其他组件知之甚少。我们发现Rab8 GTPase就是其中之一。组成性激活的GTP水解突变体的表达选择性地抑制新合成膜蛋白的基底外侧（而非顶端）转运。此外，这种影响仅限于AP-1B依赖的基底外侧货运；尽管突变体Rab8过度表达，但含有与AP-1B不相互作用的二亮氨酸靶向基序的蛋白质的基底外侧转运被正常靶向。Rho GTPase Cdc42的一个显性负等位基因也获得了类似的结果，该等位基因以前与基底外侧转运有关，但现在显示对AP-1B途径具有选择性。Rab8-GFP与AP-1B复合物以及密切相关但普遍表达的AP-1A复合物一起定位于TGN再循环内体的膜。然而，活性Rab8的表达导致AP-1B复合物的选择性分离，反映了Rab8对AP-1B依赖性转运的特异性。

许多病毒融合介导的糖蛋白将α螺旋束的形成与膜融合结合，但有不同的融合激活方法。为了研究副粘病毒介导的融合，我们在与七肽重复序列（HR）B相邻的保守残基L447和I449处突变了SV5融合（F）蛋白，并结合到融合形成六螺旋束（6HB）结构中HRA三聚螺旋线圈的一个突出腔。对完整F蛋白和6HB中L447和I449残基的分析表明，这些残基周围有一个具有双重结构作用的变质区域。L447和I449突变为脂肪族残基会破坏6HB结构的稳定性并减弱融合活性。将L447和I449突变为芳香族残基也会破坏6HB结构的稳定性，尽管会促进过度活跃的融合，这表明6HB稳定性本身并不决定融合性。因此，副粘病毒F中与HRB相邻的残基L447和I449在融合激活和6HB形成中具有不同的作用，表明该区域参与构象转换。

晚期胚胎发生丰富（LEA）蛋白质包含许多松散相关的蛋白质组，最初在植物中发现，但现在在非植物物种中发现。尽管有大量证据表明LEA蛋白与抗干燥性有关，但其确切功能尚不清楚。使用一些基于统计的生物信息学工具，结合一些先前的发现，重新检查了涵盖所有组的一大组LEA蛋白的分类。基于肽组成的搜索返回不同LEA基团组成相似的蛋白质；然后应用关键词聚类来揭示暗示组属性的关键词和短语。