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.1998年4月24日;273(17):10777-83.
doi:10.1074/jbc.273.17.10777。

小鼠胸腺中的Bax是一种可溶性单体蛋白,显示不同的洗涤剂诱导构象

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小鼠胸腺中的Bax是一种可溶性单体蛋白,显示不同的洗涤剂诱导构象

Y T Hsu先生等。 生物化学杂志. .
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摘要

Bcl-2、Bcl-XL和Bax是Bcl-2家族的成员,在细胞凋亡调节中发挥重要作用。这些蛋白被认为是膜结合的,并通过形成同源和异源二聚体来调节细胞凋亡。然而,我们最近通过亚细胞分馏发现,虽然如前所述,Bcl-2主要是一种膜蛋白,但Bax和大量Bcl-XL可溶于胸腺细胞和脾细胞提取物。此外,我们已经证明Bax形成二聚体的能力似乎是一种洗涤剂诱导的现象,与洗涤剂诱导构象变化相一致。我们进一步研究了Bax在各种洗涤剂存在下的第三和第四状态。Triton X-100和Triton X-114等洗涤剂容易实现Bax异二聚和同二聚。然而,其他清洁剂,如聚二十二碳醇、W-1、辛基葡萄糖苷、十二烷基麦芽糖苷、吐温20和胆酸钠,允许不同程度的Bax异二聚和同二聚。洗涤剂如3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基氨]-1-丙磺酸(Chaps)和Brij 35不允许形成异二聚体或同二聚体。用构象敏感抗体uBax 6A7进行免疫沉淀分析表明,虽然Triton X-100容易暴露N末端Bax表位(氨基酸13-19),但Triton X-114、多聚多糖醇、十二烷基麦芽糖苷和胆酸钠中仅出现有限的表位暴露,在W-1、Chaps、,辛基葡萄糖苷、吐温20和Brij 35。此外,基于该蛋白的免疫纯化,我们无法检测到任何与Bax细胞溶质形式相关的蛋白。细胞溶质Bax的Sephacryl S-100凝胶过滤色谱分析表明,该蛋白为单体,表观分子量为25kDa。通过交联研究确定,诱导脱附导致可溶形式Bax插入膜中并没有导致明显的Bax/Bcl-XL、Bax/Bcl-2或Bax/Bax二聚体形成。在Chaps存在下通过免疫沉淀诱导细胞凋亡后对Bax的进一步分析也显示没有显著的异二聚体形成。总之,Bax在不同的洗涤剂中显示出几种不同的状态,暴露出蛋白质的特定区域。此外,这些结果表明,除了Bcl-2家族成员之间的简单二聚化之外,调节细胞凋亡可能还需要其他机制。

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