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.1993年2月;11(2):187-93.
doi:10.1038/nbt0293-187。

绕过大肠杆菌细胞质中包涵体形成的硫氧还蛋白基因融合表达系统

附属公司

绕过大肠杆菌细胞质中包涵体形成的硫氧还蛋白基因融合表达系统

E R拉瓦利等。 生物技术(纽约). 1993年2月.

摘要

我们利用大肠杆菌硫氧还蛋白(trxA)作为基因融合伙伴,开发了一种通用的大肠杆菌表达系统。多种哺乳动物细胞因子和生长因子作为硫氧还蛋白融合蛋白的产生说明了该系统的广泛用途。尽管这些细胞因子中的许多以前是以不溶性聚集体或“包涵体”的形式在大肠杆菌中产生的,但我们在这里表明,作为硫氧还蛋白融合体,它们可以以具有生物活性的可溶性形式产生。总的来说,我们发现与硫氧还蛋白的连接显著增加了在大肠杆菌细胞质中合成的异源蛋白的溶解度,硫氧还毒素融合蛋白通常积累到较高水平。大肠杆菌硫氧还蛋白的两个额外特性,即通过渗透休克或冷冻/解冻处理从大肠杆菌细胞质中特异性释放的能力及其固有的热稳定性,通过一些融合得以保留,并提供了方便的纯化步骤。我们还发现,大肠杆菌硫氧还蛋白的活性位点环可以用作小肽插入的一般位点,从而在大肠杆菌细胞质中大量产生可溶性肽。

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