Integrin alpha 6 expression in human prostate carcinoma cells is associated with a migratory and invasive phenotype in vitro and in vivo

doi:10.1007/BF00118187

.1995年11月；13(6):481-91.

doi:10.1007/BF00118187。

整合素α6在人前列腺癌细胞中的表达与体内外迁移和侵袭表型相关

I拉比诺维茨¹, R B纳格尔, A E克雷斯

附属公司

PMID： 7586806
预防性维修识别码：项目经理2846819
内政部： 2007年10月10日/BF00118187

整合素α6在人前列腺癌细胞中的表达与体内外迁移和侵袭表型相关

I拉比诺维茨等。临床表现转移. 1995年11月.

.1995年11月；13(6):481-91.

doi:10.1007/BF00118187。

作者

I拉比诺维茨¹, R B纳格尔, A E克雷斯

附属

¹美国图森85724亚利桑那大学癌症中心放射肿瘤学系。

PMID： 7586806
预防性维修识别码：项目经理2846819
内政部： 2007年10月10日/BF00118187

摘要

细胞粘附和迁移是肿瘤侵袭的重要特征，部分由整合素（细胞外基质受体）介导。整合素在人类前列腺癌中显著降低。一个例外是α6整合素（层粘连蛋白受体），在前列腺肿瘤进展期间持续存在。我们从人类前列腺癌细胞系DU145中选择了α6整合素的高表达（DU-H）和低表达（DU-L），以实验评估α6整合素在肿瘤侵袭中的重要性。与DU-L细胞相比，DU-H细胞表面α6整合素的表达增加了四倍。这两种细胞类型都含有相似数量的α3和α5整合素。DU-H细胞含有与β1和β4亚单位复合的α6亚单位，而DU-L细胞含有仅与β4复合的α8亚单位。DU-H细胞在层粘连蛋白上的流动性是DU-L的三倍，但在层粘着蛋白上的粘附性相似。抗α6抗体抑制粘附和迁移。将每个亚系腹腔注射到SCID小鼠中，以测试其侵袭潜能。结果显示，与DU-L细胞相比，DU-H细胞的侵袭性更强，侵袭区域肿瘤上α6整合素的表达增加。这些数据表明，α6整合素的表达有利于前列腺肿瘤细胞的侵袭。

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图1
α6整合素高表达（DU-H）和低表达（DU-L）的筛选和FACS分析。通过从荧光激活细胞分选（FACS）测定的2%“尾部”收集细胞，选择高或低α6表达的细胞。已展开排序的单元格*在体外*按照同样的程序进行了七次求助。荧光以通道表示。大约75个通道构成荧光强度的两倍。（A）阴性对照细胞的荧光细胞分布（仅与二级抗体反应）。（B）预分类DU145细胞的荧光细胞分布。（C） 7轮分选后高、低α6整合素表达子的荧光细胞分布。（D）上次分拣后两个月。

图2
间接免疫荧光显微镜下α6整合素的分布。细胞生长在盖玻片上，用PBS洗涤，在4°C下与抗α6抗体（GoH3）孵育30分钟，然后在4°C下洗涤，然后与FITC-结合的抗鼠抗体孵育30min，然后用4%甲醛固定，并用Elvanol固定。通过共聚焦荧光显微镜（A和C）或相差显微镜（B，D）分析制剂。（A和B）DU-H.（C和D）DU-L.棒材=50µm。

图3
DU-H和DU-L细胞表面整合素的生物素化和免疫沉淀。整合素从表面生物素化细胞中免疫沉淀，如材料和方法所述。蛋白质在7.5%SDS-PAGE中分离，电转移到硝酸纤维素中，与过氧化物酶偶联链霉亲和素孵育，并通过化学发光显示。（A） α6整合素用GoH3抗体（1–3道）或对照IgG抗体（4道）免疫沉淀。通道1，JAR细胞（用作阳性对照）；2号和4号车道，DU-H；用3E1抗体免疫沉淀3通道DU-L。（B）β4整合素（1–3通道）。车道1，JAR单元；车道2，DU-H；用P1D6、P1D6和P1B5抗体分别免疫沉淀第3道、DU-L（C）α5（第1道和第2道）、β1（第3道和第4道）和α3（第5道和第6道）整合素。车道1、3、5、DU-H；车道2、4、6、DU-L。箭头（从上到下）：200、97和68 kDa的蛋白质分子量标记。

图4
DU-H和DU-L细胞与层粘连蛋白和纤连蛋白的结合。如材料和方法中所述，在存在或不存在特定抗体的情况下，测试细胞对层粘连蛋白和纤维连接蛋白的粘附能力。结果以孵育1小时后附着的应用细胞总数的百分比表示。H、 DU-H；五十、 DU-L；抗α6、抗α6抗体（GoH3，20µl/ml）；抗β1、抗β1抗体（P4C10，5µl/ml）；抗α3、抗α3抗体（P1B5，10µl/ml）；FN，纤维连接蛋白。

图5
层粘连蛋白上DU-H细胞和DU-L细胞的迁移。对层粘连蛋白涂层培养皿（0–20µg/cm）中生长的细胞进行细胞迁移的视频显微镜分析²). 通过测量质心位移随时间的变化来确定随机细胞迁移。对每种情况下的70至100个细胞进行分析。（A）不同浓度的DU-H和DU-L在层粘连蛋白上的随机迁移。（B）用抗α6抗体（20µl/ml）抑制DU-H细胞和DU-l细胞对层粘连蛋白（10µg/cm）的迁移²).

图6
DU-H和DU-L细胞对SCID小鼠膈肌的侵袭。SCID小鼠腹腔注射细胞并生长31天。隔膜样品用福尔马林固定或冷冻，切片并用苏木精和伊红染色。（A）高侵袭性肿瘤（DU-H）。（B）非浸润性肿瘤（DU-L）。（C–G）DU-H和DU-L肿瘤的间接免疫荧光分析。用抗α6整合素（C，D）或人抗角蛋白（E，F）抗体对接种DU-H（C，E）和DU-L（D，F）的SCID小鼠肿瘤侵袭膈的冰冻切片进行免疫染色。作为对照，DU-H肿瘤的连续冰冻切片仅用二级抗体（G）和苏木精-伊红染色（H）染色。星号表示正常光圈边界。T、肿瘤；D、隔膜。箭头表示肿瘤的侵袭边缘。棒材=50µm。注意肿瘤的侵袭边缘是周围的肌肉纤维，并表达α6整合素。

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