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.1986年12月;129(3):375-84.
doi:10.1002/jcp.1041290316。

黑色素瘤生长刺激活性的纯化

黑色素瘤生长刺激活性的纯化

A里士满等。 J细胞生理学. 1986年12月.

摘要

Hs0294人恶性黑色素瘤细胞系产生单层有丝分裂原,刺激Hs0294-细胞低密度培养物的无血清生长。本报告描述了从Hs0294培养物的无血清条件培养基中纯化被称为MGSA的促黑色素瘤生长活性有丝分裂原。MGSA通过凝胶过滤、反相高压液相色谱(RP-HPLC)和制备电泳从冻干条件培养基的乙酸提取物中纯化,纯化倍数超过40万倍。MGSA的生物活性存在于高分子量和低分子量(24-28 kd和小于14-16 kd)的酸和热稳定性多肽中。然而,大多数活性与在约35%乙腈下从RP-HPLC洗脱的约16-kd部分重复相关。用二硫苏糖醇或B-巯基乙醇还原会导致生物活性丧失,但不会将24-28-kd部分转化为小于14-16-kd的MGSA形式。通过制备电泳(16kd)纯化的125I-MGSA特异性结合Hs0294黑色素瘤细胞,并保留100%的生长刺激活性。16-kd MGSA在0.3-30 pM的浓度下刺激Hs0294细胞的增殖。制备电泳程序也未改变MGSA的电泳迁移率,进一步证明该程序不会改变生长因子的生化完整性。纯化的MGSA不能实现正常大鼠肾脏(NRK)细胞的锚定非依赖性生长,因此与之前描述的转化生长因子不同。MGSA的氨基酸组成与之前描述的其他生长因子的氨基酸组成不同。这些数据表明,MGSA代表一类独立的生长因子,其生物学和生化特性不同于其他生长因子。

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