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.1986年6月；6(6):2041-52.
doi:10.1128/mcb.6.6.2041-252.1986。

Alu家族重复序列前后启动子元件的竞争和合作功能

C Perez稳定, C K沈

Alu家族重复序列前后启动子元件的竞争和合作功能

C Perez稳定等。 分子细胞生物学. 1986年6月.

摘要

与tRNA基因和VAI基因类似，Alu家族重复序列由RNA聚合酶III转录，并包含一个分裂的基因内启动子。我们以前的研究结果表明，当删除人类Alu家族重复序列的前部包含方框A的启动子元件（其中Pu是任何嘌呤，Py是任何嘧啶，N是任何核苷酸）时，剩余的包含方框B的启动子元素（5'-G-A/T-C-Pu-A-N-C-3’）仍然能够在盒B序列上游约70个碱基对（bp）处引导弱转录起始。这与tRNA基因不同，在tRNA基因中，含有盒A的启动子元件在转录起始位点的定位中起主要作用。为了解释这种差异，我们首先进行了竞争实验，其中我们表明Alu重复序列的后成分与VAI基因有效竞争HeLa细胞提取物中的转录因子C。然后我们构建了一系列Alu重复序列启动子的收缩和扩张突变体，其中框a和框B之间的间距通过分子克隆系统地改变。通过RNA凝胶电泳和引物延伸图谱分析这些克隆在HeLa细胞提取物中的体外转录。我们发现，当盒A和盒B启动子序列分离47到298 bp时，转录起始位点仍然位于盒A上游4到5 bp。然而，当间隔缩短到只有26 bp或增加到超过600 bp时，包含盒A的启动子元件的定位功能丢失。相反，转录起始发生在盒B上游约70 bp处，与仅包含盒B启动子元件的克隆相似。所有突变克隆的转录效率都低于野生型。方框A和B之间距离的增加也激活了Alu族重复中的第二个方框A样元素。我们将这些结果与tRNA基因研究的结果进行了比较。我们还从分裂的III类启动子元件的定位功能和两个启动子元件之间的间距进化守恒的角度讨论了这种比较，以获得最佳转录效率。

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