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.1985年9月;317(6032):84-7.
doi:10.1038/317084a0。

外切酶保护试验揭示了粗核提取物中的热休克元件和TATA盒DNA结合蛋白

外切酶保护试验揭示了粗核提取物中的热休克元件和TATA盒DNA结合蛋白

C吴. 自然. 1985年9月.

摘要

由于缺乏实用的通用检测方法,鉴定和纯化调节真核基因的反作用细胞因子的能力受到限制。目前使用粗全细胞或核提取物的程序在体外恢复转录功能或允许在控制序列中重建天然染色质,仅在选定的系统中有效。我现在介绍一种核酸外切酶保护试验,该试验通常适用于检测序列特异性DNA结合蛋白。该分析扩展了早期关于粗核提取物中存在的蛋白因子(HAP)与果蝇热休克基因控制元件结合的工作;染色质中核酸超敏位点的特异性核酸外切酶抗性重建显示了这种结合。我们在这里表明,尽管在未分离的核提取物中存在许多非特异性结合活性,但同样的外切酶抗性可以在自由线性DNA上重建。我们进一步应用该分析方法分离与天然染色质中热休克基因TATA-box区域组成结合的蛋白因子。核酸外切酶保护为任何序列特异性DNA结合蛋白提供了一种灵敏、准确和快速的检测方法。

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