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.1989年10月25日;264(30):18100-9.

人转录因子IIIC(TFIIIC)。纯化、多肽结构和巯基参与特定DNA结合

附属公司
  • PMID: 2808367
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人转录因子IIIC(TFIIIC)。纯化、多肽结构和巯基参与特定DNA结合

J A克罗米什等。 生物化学杂志. .
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摘要

人转录因子IIIC(TFIIIC)是通过RNA聚合酶III体外转录5S RNA、tRNA和腺病毒相关(VA)RNA基因所需的启动因子。从培养的HeLa细胞中高度纯化了TFIIIC活性,补充纯化的TFIIIB和RNA聚合物III组分进行VA转录。通过所有色谱程序,包括B块寡核苷酸亲和色谱,利用VA基因的凝胶迁移率变化分析检测到的两种形式的TFIIIC对该活性进行共纯化(Hoefler,W.K.,Kovelman,R.和Roeder,R.G.(1988)Cell 53,907-920)。烷基化剂二异丙基氟磷酸、N-对甲苯基-L-苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)和N-乙基马来酰亚胺均抑制了对VAI基因的特异性结合活性和TFIIIC转录活性,Nα-对甲苯基-赖氨酸氯甲基酮在较小程度上抑制了其转录活性,而苯甲基磺酰氟对这两种活性均无抑制作用。这些数据进一步表明,DNA结合和转录分析得到了相同的蛋白质。TPCK和N-乙基马来酰亚胺仅通过巯基修饰使TFIIIC失活,因为之前使用可逆巯基试剂2,2'-二硫代吡啶进行的修饰阻止了TFIIIC的永久失活。添加二硫苏糖醇后,TFIIIC结合活性增加,进一步表明还原的巯基参与了TFIIIC与VAI基因的特异性结合。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,一个Mr=126000的多肽既从具有TFIIIC DNA结合和转录活性的B区寡核苷酸亲和柱中洗脱出来,又被UV特异交联到一个5-溴-2-脱氧核苷酸取代的B区少脱氧核苷酸。通过SOTA阶段GF 200凝胶过滤测定的TFIIIC分子量的近似一致性(Mr=140000)表明,TFIIIC在溶液中(在pH 7.0下存在0.3 M NaCl)由单个多肽组成,其性质相当球状。

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