跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
比较研究
.2015年10月14日；238(2):83-9.
doi:10.1016/j.toxlet.2015.07.004。 Epub 2015年7月26日。

人类Nrf2抗体的比较：两种蛋白质的故事

扎卡里·凯默勒 1, 尼古拉斯·阿德尔 1, 莎拉·穆罗伊（Sarah S Mulroy） 1, 艾美·L·艾格勒 2
附属公司
比较研究

人类Nrf2抗体的比较：两种蛋白质的故事

扎卡里·凯默勒等。 毒物快报. .

摘要

Nrf2转录因子是细胞抵抗氧化和亲电应激的主要调节因子。Nrf2蛋白水平的增加和核内Nrf2的积累是Nrf2激活机制的关键部分。western blot技术仍然是评估这些变化最广泛使用的方法。一种特征明确、特异性强的商用抗体将大大加强该领域的研究。这里，一种明显高度特异的Nrf2单克隆抗体，来自Abcam的EP1808Y，在一组人类细胞系中与最广泛使用的Nrf1抗体，H-300和C-20进行了比较。除了检测Nrf2外，EP1808Y还贪婪地检测到三个被测细胞系中的两个细胞中存在的另一种蛋白质。这种蛋白质可能被误认为是Nrf2，因为它在两种不同的聚丙烯酰胺凝胶类型上与经验证的Nrf2共迁移。然而，与Nrf2不同，其水平和细胞质定位不受Nrf2活化剂治疗的影响。siRNA和免疫缺失实验排除了该条带对应于Nrf2形式的可能性。最后，发现来自Cell Signaling的单克隆抗体D1Z9C可检测这四种抗体中特异性最高的Nrf2。

关键词：抗体；Nrf2；蛋白质印迹。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。EP1808Y单克隆抗体与两种常用Nrf2多克隆抗体的比较
用5μM SFN处理细胞2h，用10%Tris-glycine SDS-PAGE和western blotting分析全细胞裂解产物。（A） 在HepG2细胞裂解物中检测到使用EP1808Y抗体在亮度水平下的检测，并且SFN处理没有改变。（B） 截短的污点A类显示为全长（中心），亮度增加以显示在HaCaT和THLE-2裂解物中的检测结果。用H-300（左）和C-20（右）抗体探测相同的印迹。箭头指示Nrf2迁移的位置。M、 标记。印迹是n=3个生物复制品的代表。
图2
图2。双三梯度凝胶上的Nrf2带迁移率
用5μM SFN处理细胞2h，并用4–12%的Bis-Tris SDS PAGE和western blotting分析全细胞裂解物。用H-300（左）、EP1808Y（中）和C-20（右）抗体探测相同的印迹。箭头指示Nrf2迁移的位置。印迹是n=2个生物复制品的代表。
图3
图3。EP1808Y单克隆抗体检测蛋白在HepG2细胞中的细胞定位
用50μM tBHQ或5μM SFN处理细胞2 h，并对全细胞裂解物进行核质分离。全细胞裂解物和组分通过10%三甘氨酸SDS-PAGE和western blotting进行分析。用H-300和EP1808Y抗体检测相同的印迹。印迹是n=3个生物复制品的代表。
图4
图4。免疫缺失和Nrf2敲除用于评估EP1808Y在HepG2细胞中检测到的一级带
（A） 关于H-300和EP1808Y抗体表位的三个已知交替分裂转录物的三个Nrf2亚型示意图。转录本编号与蛋白质亚型的编号一致。Nrf2 mRNA的三种市售siRNA靶向转录本上的指定位点。（B） 用5μM SFN或5μM MG132处理HepG2细胞2 h，用指示的抗体或单独的珠（−）对整个细胞裂解物进行免疫去除。然后用10%三甘氨酸SDS-PAGE和western blotting分析耗尽的裂解产物。用H-300和EP1808Y抗体检测相同的印迹。印迹是n=3个生物复制品的代表。（C） 用siRNA（10μM个体，30μM组合）反向转染HepG2细胞24 h，然后用5μM SFN处理2 h。用10%Tris-glycine SDS-PAGE和western blotting分析全细胞裂解产物。用H-300和EP1808Y抗体检测相同的印迹。C siRNA，对照siRNA。Blot代表n=2个生物复制。
图5
图5。D1Z9C单克隆抗体与H-300在细胞系中的比较
如图所示，用SFN处理细胞2 h，并用10%三甘氨酸SDS-PAGE和western blotting分析全细胞裂解物。箭头表示与Nrf2相对应的带的位置，如它们对SFN的响应增加所示。印迹是n=2个生物复制品的代表。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Apopa-PL、He X、Ma Q。酪蛋白激酶2（CK2）在转录激活结构域中对Nrf2的磷酸化对IMR-32神经母细胞瘤细胞中Nrf2的核转位和转录激活功能至关重要。生物化学分子毒理学杂志。2008;22:63–76. doi:10.1002/jbt.20212。-内政部-公共医学
    1. Baird L，Dinkova-Kostova A.Keap1-Nrf2通路的细胞保护作用。毒理学档案。2011;85:241–272. doi:10.1007/s00204-011-0674-5。-内政部-公共医学
    1. Baker M.再现性危机：归咎于抗体。自然。2015;521:274–276. doi:10.1038/521274a。-内政部-公共医学
    1. Boukamp P、Petrussevska RT、Breitkreutz D、Hornung J、Markham A、Fusenig NE。自发性永生化非整倍体人角朊细胞系中的正常角化。《细胞生物学杂志》。1988;106:761–771. doi:10.1083/jcb.106.3.761。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Deighton RF、Markus NM、Al-Mubarak B、Bell KF、Papadia S、Meakin PJ、Chowdhry S、Hayes JD、Hardingham GE。在缺乏Nrf2和星形胶质细胞的情况下，Nrf2靶基因可由神经元活动控制。美国国家科学院院刊2014；111:E1818–1820。doi:10.1073/pnas.1402097111。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

LinkOut-更多资源