Inhibition of vascular endothelial growth factor by small interfering RNA upregulates differentiation, maturation and function of dendritic cells

doi:10.3892/etm.2014.2059

.2015年1月；9(1):120-124.

doi:10.3892/etm.2014.2059。 Epub 2014年11月11日。

小干扰RNA抑制血管内皮生长因子上调树突状细胞的分化、成熟和功能

王海燕¹, 张路平（Luping Zhang）², 张少燕^三, 李延年¹

附属公司

¹青岛大学附属医院输血科，青岛大学，青岛，266033，中国。
²中国山东青岛大学青岛海瑟医院临床实验室，邮编266033。
^三青岛大学附属医院临床实验室，青岛大学，中国山东青岛266033。

PMID： 25452786
PMCID公司： PMC4247311项目
内政部： 10.3892/等2014.2059

小干扰RNA抑制血管内皮生长因子上调树突状细胞的分化、成熟和功能

王海燕等。实验治疗学. 2015年1月.

.2015年1月；9(1):120-124.

doi:10.3892/etm.2014.2059。 Epub 2014年11月11日。

作者

王海燕¹, 张路平（Luping Zhang）², 张少燕^三, 李延年¹

附属公司

¹青岛大学附属医院输血科，青岛大学，青岛，266033，中国。
²中国山东青岛大学青岛海瑟医院临床实验室，邮编266033。
^三青岛大学附属医院临床实验室，青岛大学，中国山东青岛266033。

PMID： 25452786
PMCID公司： PMC4247311项目
内政部： 10.3892/等2014.2059

摘要

本研究旨在探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子（VEGF）对树突状细胞（DC）分化、成熟和功能的影响。设计针对VEGF基因的小干扰RNA（siRNAs），并使用阳离子脂质体转染试剂以最佳浓度（100 nmol/l）转染到MCF-7乳腺癌细胞，而对照组仅使用转染试剂转染。Western blot分析和ELISA分别检测VEGF蛋白表达和VEGF浓度。用来自原代MCF-7细胞（对照组）和siRNA处理的MCF-7细胞（siRNA组）的培养上清液培养单核细胞。流式细胞术检测DC表型，包括CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR。MTT法用于评估两种不同培养上清液中DC介导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对MCF-7细胞的细胞毒性。VEGF靶向构建的siRNA抑制MCF-7细胞中VEGF的表达。用经siRNA处理的MCF-7细胞培养上清培养会影响DC形态。与对照组的细胞相比，siRNA组的DC表现出CD86、CD80、CD83和HLA-DR的高表达，而siRNA组CD1a的表达明显低于对照组。siRNA转染显著改变了DC介导的CTL的细胞毒活性。这些结果表明，VEGF可能在肿瘤的发展、进展和免疫抑制中发挥重要作用。

关键词：MCF-7；细胞毒性T淋巴细胞；树突状细胞；外周血单个核细胞；小干扰RNA；血管内皮生长因子。

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数字

图1
血管内皮生长因子（VEGF）蛋白水平对不同小干扰（si）RNA浓度的反应。直方图表示存在siRNA（25、50、100和200 nmol/l）、干扰siRNA（siRNA）时的VEGF蛋白水平_可控硅)和脂质内酰胺控制。数据表示为平均值+标准偏差（n=3）。^*，值与siRNA显著不同_可控硅（P<0.05）；^**，值与25nmol/l的siRNA显著不同（P<0.05）；^***，值与50 nmol/l siRNA显著不同（P<0.05）。

图2
western blot分析检测MCF-7细胞中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。以最佳浓度（100 nmol/l）使用Lipofectamine 2000将针对VEGF基因的小干扰（si）RNA转染到MCF-7细胞中，而对照组仅转染Lipofeectamine 2000。β-肌动蛋白作为内部对照。小核糖核酸_可控硅，扰乱siRNA。

图3
（A）空白对照，（B）小干扰（si）RNA和（C）干扰siRNA（siRNA）外周血单个核细胞的形态学观察_可控硅)组。第8天用荧光显微镜拍摄显微图像。

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