由SKF81297处理样品中确定的候选蛋白质表示的蛋白质网络。（A） 参与细胞组装和组织、神经系统发育和功能、细胞间信号传递和相互作用的蛋白质网络，由以下分子组成：ATP酶、钙2+转运，质膜2（ATP2B2）；ATP酶，H+转运，溶酶体38kDa，V0亚单位d1（ATP6V0D1）；非典型蛋白激酶C；巴松管（BSN）；Ca2 ATP酶；钙通道，电压依赖性2/δ亚单位1（CACNA2D1）；细胞粘附分子1（CADM1）；细胞粘附分子3（CADM3）；椎间盘，大同源物1（果蝇）（DLG1）；圆盘，大同源物2（果蝇）（DLG2）；糖原合成酶激酶3α（GSK3）；H（H）+-ATP酶输出；海马钙素（HPCA）；钾电压门控通道，振荡相关亚家族，B成员1（KCNAB1）；钾电压门控通道，振荡相关亚家族，B成员2（KCNAB2）；钾大电导钙激活通道亚家族M，α成员1（KCNMA1）；微管相关蛋白1A（MAP1A）；微管相关蛋白τ（Mapt）；N型钙通道；磷酸果糖激酶，肝脏，（PFKL）；蛋白酪氨酸磷酸酶，受体类型，f多肽（PTPRF）相互作用蛋白（脂蛋白），α3，（PPFIA3）；Ppp2c；PRKAC；蛋白激酶，cAMP依赖性，调节性，II型，B（PRKAR2B）；RAB2A，RAS癌基因家族成员（RAB2A）；调节突触膜胞吐1（Rims1）；Ras和Rab相互作用物1（RIN1）；兔亲和素3A同源物（小鼠）（RPH3A）；SERCA；突触体相关蛋白25kDa（SNAP25）；syntaxin 1A（脑）；突触囊泡糖蛋白2B（SV2B）；unc-13同源物A（秀丽线虫）（UNC13A）。（B） 参与蛋白质合成、细胞组装和组织、遗传疾病的蛋白质网络：19S蛋白酶体；26S蛋白酶体；60S核糖体亚基；腺苷同型半胱氨酸酶；血管紧张素II受体1型；ADP核糖基化因子2（Arf2）；ADP-核糖基化因子3（ARF3）；Arf；Rho/Rac鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）2（ARHGEF2）；Cdc2；CSE1；染色体分离1样（酵母）（CSE1L）；DEAD（Asp-Glu-Ala-Asp）盒多肽3，X-连锁（DDX3X）；动力蛋白，细胞质1，重链1（DYNC1H1）；真核生物翻译延伸因子1γ（EEF1G）；真核生物翻译起始因子4A2（EIF4A2）；Eif4g；核糖体蛋白L7A假基因（Gm5619/Gm5845）；异质核核糖核蛋白D（AU-rich element RNA binding protein 1，37kDa）（HNRNPD）；进口蛋白5（IPO5）；马普；调解人；RAS癌基因家族成员RAN；核糖体蛋白RPL4；RPL13；RPL15；RPL17；RPL19；RPL24；RPL35；RPL13A；RPL18A；RPS8；RPS25；富含丝氨酸/精氨酸剪接因子1（SRSF1）；酪氨酸3-单氧化酶/色氨酸5-单氧化酶激活蛋白，γ多肽（YWHAG）。灰色图标，SKF81297和车辆处理样品中均存在分子；洋红色图标，仅SKF81297处理样品中存在的蛋白质；白色图标，两个样品中都没有识别出分子。
通过Western blot分析验证新合成的候选蛋白质。用aCSF和4 mM AHA+/-SKF81297刺激（40μM）或+/-茴香霉素（40μM）培养2.5小时，从树突状片段中分离出新合成的蛋白质，然后进行Western blot分析。（A） Western blot分析使用抗生物素抗体检测新合成的成功结合AHA的蛋白质。在所示车道中，In=1%输入；SUP=1%上清液；ELU=洗脱液的10%；BDS=10%珠（洗脱后）。在AHA处理过的样品中，大多数新合成的蛋白质都在洗脱液中检测到，珠子上几乎没有留下信号。在包含茴香霉素的实验中，整个印迹中出现的生物素化信号少得多，洗脱液中存在的生物素蛋白数量大大减少。（B） 在生物素化蛋白质洗脱后，对感兴趣的单个蛋白质进行Western blot分析。获得了新合成的MAP2、CAMKIIα、β-actin、Pan-Cadherin和Homer 1的明确证据。MAP2、CAMKIIα、β-actin和原钙粘蛋白是MS鉴定的候选蛋白。FMRP作为阴性对照。
