摘要
真核生物翻译延伸因子1A（eEF1A）除了在蛋白质合成中发挥典型作用外，还参与其他几种细胞过程，具体取决于细胞位置、细胞类型、配体浓度、底物或辅因子的变化。因此，eEF1A是一种兼职蛋白，参与涉及其结构域的分子相互作用网络。由于鉴定新的蛋白质相互作用是后基因组时代的重要任务，因此采用蛋白质组学方法研究了eEF1A1 M结构域的相互作用组。为此，eEF1A1 M结构域分别与谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和Strep-tag（ST）在其N端和C端融合。纯化重组蛋白（GST-M-ST），并通过应用亲和色谱策略与小鼠胚胎裂解物孵育。相互作用蛋白用SDS-PAGE分离，用MALDI-TOF质谱进行肽质谱指纹鉴定。除了已知的伴侣外，相互作用蛋白库还包含山梨素，山梨素是一种由153个氨基酸组成的多肽，存在于SH3结构域的衔接蛋白中，如SORBS2。通过Western blot对小鼠胚胎或H1355细胞裂解液中的免疫沉淀物与抗eEF1A或抗SORBS2抗体的相互作用以及eEF1A1-His从H1355淋巴细胞裂解液中与抗SORBS2抗体的下拉作用进行了评估。此外，共聚焦显微镜和FRET分析也证实了eEF1A和SORBS2之间的相互作用。有趣的是，SORBS2和eEF1A在质膜水平上共同定位，因此表明eEF1A1参与了新的关键信号转导复合物。
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