Selection of brain metastasis-initiating breast cancer cells determined by growth on hard agar

doi:10.1016/j.ajpath.2011.01.047

.2011年5月；178(5):2357-66.

doi:10.1016/j.ajpath.2011.01.047。

通过在硬琼脂上生长确定脑转移起始乳腺癌细胞的选择

郭丽霞¹, 多米尼克·范, 张法豪, 珍妮特·普莱斯, Ju-Seog Lee先生, 达里奥·马切蒂, 以赛亚·J·菲德勒, 罗伯特·兰利

附属公司

PMID： 21514446
预防性维修识别码：下午3081177
内政部： 10.1016/j.ajpath.2011.01.047

硬琼脂培养法筛选脑转移诱导乳腺癌细胞

郭丽霞等。美国病理学杂志. 2011年5月.

.2011年5月；178(5):2357-66.

doi:10.1016/j.ajpath.2011.01.047。

作者

郭丽霞¹, 多米尼克·范, 张法豪, 珍妮特·普莱斯, Ju-Seog Lee先生, 达里奥·马切蒂, 以赛亚·J·菲德勒, 罗伯特·兰利

附属

¹德克萨斯大学医学博士安德森癌症中心癌症生物学系-癌症转移研究中心，美国德克萨斯州休斯顿。

PMID： 21514446
预防性维修识别码：项目经理3081177
内政部： 10.1016/j.ajpath.2011.01.047

摘要

一种有助于快速分离和鉴定转移潜能增强的肿瘤细胞的方法是非常可取的。在这里，我们证明了将GI-101A人乳腺癌细胞镀在硬琼脂（0.9%）上可以选择转移诱导细胞的亚群。琼脂选择的细胞，命名为GI-AGR，CD44（+）和CD133（+）均一，侵袭性是亲本GI-101A细胞的五倍。此外，与注射GI-101A细胞的小鼠相比，注射GI-AGR细胞的小鼠实验性脑转移明显更多，总体生存期更短。比较基因表达分析显示，GI-AGR细胞与亲代细胞明显不同，但与GI-101A亚系GI-BRN具有重叠的基因表达模式，该基因表达模式是通过实验性脑转移模型中GI-101A细胞的体内重复循环产生的。对GI-AGR和GI-BRN乳腺癌细胞共有216个基因的数据挖掘表明，这些细胞的分子表型与肿瘤干细胞和乳腺癌侵袭性基础亚型的分子表型一致。总之，这些结果表明，硬琼脂试验中的细胞生长分析是在异质性乳腺癌细胞群中选择转移诱导细胞的有力工具，并且这样选择的细胞具有类似于基于它们在小鼠中形成转移的潜力而选择的肿瘤细胞的性质。

PubMed免责声明

数字

图1
在硬琼脂上电镀可选择少量GI-101A乳腺癌细胞。答：GI-101A细胞以5000个细胞/孔的速度接种在0.3%、0.6%或0.9%琼脂上。60天后评估琼脂上的细胞生长。B：每个琼脂表面的菌落数记录为三份；数据以平均值±标准偏差报告。在0.6%琼脂上形成的菌落数(**P（P）*<0.0005）和0.9%琼脂(***P（P）*=0.0001）显著低于在0.3%琼脂上形成的。

图2
0.9%琼脂上的平板选择侵袭性和转移性GI-101A细胞。答：将GI-101A和GI-AGR细胞接种到8μm Matrigel-coated插入物的上腔上，记录侵入细胞的数量。试验重复三次；给出了一个典型实验的结果。B：Kaplan-Meier图比较注射亲代GI-101A细胞和GI-AGR细胞的小鼠的存活时间。**抄送：**注射后60天由GI-AGR细胞形成的小鼠脑转移瘤的H&E染色(左边)和GI-101A细胞注射后90天(**正确的**)细胞进入颈总动脉。**插图：**高倍镜下的肿瘤细胞。原始放大倍数，×20。比例尺=50μm。

图3
GI-AGR和GI-BRN细胞在硬琼脂上的生长能力高于GI-101A细胞。将GI-101A、GI-AGR和GI-BRN细胞培养在0.3%、0.6%或0.9%琼脂上的六孔板（5×10^三细胞/孔）30天。比例尺=100μm。

图4
GI-101A、GI-AGR和GI-BRN细胞的比较转录谱。答：使用的选择标准*P（P）*<0.001，基因表达变化>2，共有402个基因在亲代GI-101A和GI-AGR细胞中差异表达；373个基因在GI-101A细胞和GI-BRN细胞中差异表达，其中216个差异表达基因在GI-AGR和GI-BRNA细胞中均表达。B：RT-PCR分析*FOXA1公司*,*MSX1系列*,*GABRP公司*、和*BNC1*在GI-101A、GI-AGR和GI-BRN细胞中。β-actin作为负荷对照。**抄送：**Western blot分析表明，sFRP1和DKK3在GI-BRN和GI-AGR细胞中的表达显著低于亲代GI-101A细胞。

图5
GI-101A细胞中CD133的高表达与硬琼脂上的生长和这些细胞的脑转移有关。答：用异硫氰酸荧光素结合CD44和藻红蛋白结合CD133抗体标记GI-101A、GI-AGR和GI-BRN细胞，然后用流式细胞术进行分析。B：CD133型^高的GI-101A细胞形成比CD133更大、数量更多的集落^低的细胞置于0.9%琼脂上。**抄送：**小鼠脑转移瘤和由GI-101A细胞形成的乳腺脂肪垫肿瘤（mfp）中CD133的免疫荧光染色。

图6
CD133的代表性免疫组织化学染色(一)和CD44(B类)在人类乳腺癌脑转移的临床样本中。原始放大倍数，×200。比例尺=100μm。

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