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.1991年9月;65(9):4636-44.
doi:10.1128/JVI.65.9.4636-4644.1991。

人类免疫缺陷病毒整合酶蛋白需要其病毒DNA识别序列的亚末端位置才能有效切割

附属公司

人类免疫缺陷病毒整合酶蛋白需要其病毒DNA识别序列的亚末端位置才能有效切割

C Vink公司等。 J维罗尔. 1991年9月.

摘要

逆转录病毒整合需要在线性双链病毒DNA末端的顺式作用序列和逆转录病毒pol基因的产物整合酶蛋白(IN)。IN对于病毒DNA的凹陷3'末端的生成(前病毒整合的第一步)和凹陷DNA物种的体外整合来说是必需的且足够的。将在大肠杆菌中表达的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)IN纯化至接近同质性。使用纯化的in和与HIV DNA末端相对应的短双链寡核苷酸,在物理测试中研究了逆转录病毒DNA特异性切割和整合的底物序列要求。IN切割位点周围的一些点突变显著降低了切割;大多数其他突变没有产生剧烈的影响,这表明序列要求是有限的。逆转录病毒DNA的末端15 bp被证明足以被IN识别。通过IN对逆转录病毒的DNA进行有效的特异性切割需要切割位点,即保守的CA-3'二核苷酸3'侧的磷酸二酯键,位于距离病毒DNA末端两个核苷酸的位置;然而,当切割位点位于离双链病毒DNA末端1、3、4或5个核苷酸处时,切割效率较低。当CA-3’二核苷酸的核苷酸3’以单链DNA的形式存在时,检测到IN的切割增加。研究发现,IN对促进双链DNA而非单链DNA的整合有强烈的偏好。

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    1. 单元格。1985年1月;40(1):9-17-公共医学
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