Analytical strategies for LC-MS-based targeted metabolomics

doi:10.1016/j.jchromb.2008.04.031

比较研究

.2008年8月15日；871(2):236-42.

doi:10.1016/j.jchromb2008.04.031。 Epub 2008年4月29日。

基于LC-MS的靶向代谢组学分析策略

文云路¹, 布莱森·D·贝内特, 约书亚·D·拉比诺维茨

附属公司

PMID： 18502704
预防性维修识别码： PMC2607197型
内政部： 2016年10月10日/j.jchromb2008.04.031

比较研究

基于LC-MS的靶向代谢组学分析策略

文云路等。色谱B分析技术生物生命科学杂志. 2008.

.2008年8月15日；871(2):236-42.

doi:10.1016/j.jchromb2008.04.031。 Epub 2008年4月29日。

作者

文云路¹, 布莱森·D·贝内特, 约书亚·D·拉比诺维茨

附属

¹美国新泽西州普林斯顿市普林斯顿大学刘易斯·西格勒综合基因组研究所和化学系，邮编08544。

PMID： 18502704
预防性维修识别码： PMC2607197型
内政部： 2016年10月10日/j.jchromb2008.04.031

摘要

质谱学的最新进展使内源性代谢物的分析得以改进。在这里，我们讨论了与开发液相色谱-电喷雾电离质谱法用于靶向代谢组学相关的几个问题（即数十到数百种特定代谢物的定量分析）。讨论了样品制备和液相色谱法，着眼于并行处理各种代谢物类别的挑战。有证据表明，与更传统的未加热电喷雾电离相比，加热电喷雾离子化（ESI）通常能提供更好的信号。描述了在多反应监测（MRM）模式下运行的三重四极杆质谱和高质量分辨率全扫描质谱（例如飞行时间、Orbitrap）在靶向代谢组学中的适用性。我们认为这两种方法都是可行的解决方案，当靶向数量较少的分析物时，首选MRM，而全扫描因其潜在的桥接靶向和非靶向代谢组学的能力而首选。

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数字

图1
细胞提取物中选定代谢物的色谱迹线，比较HILIC（顶面板）和反相离子对色谱（底面板）方法在负电离模式下在相同质谱条件下的性能。选定的代谢物为：葡萄糖-6-磷酸及其未溶解异构体（a）、甘油-3-磷酸（b）、乳清酸（c）、NAD⁺（d）、泛酸（e）、琥珀酸（f）、苹果酸（g）、UDP-d-葡萄糖（h）、果糖-1,6-二磷酸（i）、磷酸烯醇丙酮酸（j）、NADH（k）、ATP（l）。HILIC模式的液相色谱条件（氨丙基柱，碱性pH流动相，运行时间50分钟）已在前面报道过[10]，。离子配对色谱法的LC条件（具有酸性流动相的反相Synergi-Hydro柱，运行时间50分钟）可以在文本中找到。注意，代谢物a、b、f和g在HILIC方法中未分离，而在离子对色谱法中分离良好。

图2
50 ng/mL正电离模式（a）和NAD下蛋氨酸标准液的色谱痕量⁺在负模式（b）下的生物样品中，在相同的TSQ Quantum Ultra（Thermo Fisher Scientific）三重四极仪器上，但具有不同的离子源、未加热的电喷雾源（销售线）和加热的电喷涂源（HESI，虚线）。插图显示了相应的噪声/背景区域。如前所述，LC方法为HILIC[10]。未加热ESI的源条件为：喷雾电压+3500 V或−3000 V，护套气体30 psi，辅助气体10 psi。HESI的源条件为：喷雾电压+2555 V或−2555 V，蒸发器温度230°C，护套气体22 psi，辅助气体37 psi。

图3
安捷伦TOF仪器（a）和三重四极杆仪器（b）上谷氨酸标准的线性测试结果。两者均显示出5至5000 ng/mL的线性响应，R²> 0.999. 如前所述，LC方法为HILIC[10]。

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