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.2006年2月;80(3):1361-6.
doi:10.1128/JVI.80.3.1361-1366.2006。

BK病毒受体神经节苷脂GD1b和GT1b的鉴定

附属公司

BK病毒受体神经节苷脂GD1b和GT1b的鉴定

乔纳森·A·洛等。 J维罗尔. 2006年2月.

摘要

神经节苷脂被证明是小鼠多瘤病毒和SV40的质膜受体,而JC病毒使用血清素受体。相反,对BK病毒(BKV)的膜受体和进入途径知之甚少,BKV可导致免疫抑制骨髓和肾移植患者的严重疾病。利用蔗糖浮选试验,我们研究了BKV与人红细胞膜的结合和相互作用,并确定这种相互作用依赖于神经氨酸酶敏感的蛋白酶K抗性分子。发现BKV与神经节苷脂GT1b和GD1b相互作用。这两种神经节苷脂中的末端α2-8连接的二唾液酸基序可能对这种相互作用很重要。我们还确定,向LNCaP细胞中添加GD1b和GT1b,这些细胞通常对BKV感染具有抵抗力,使其对病毒敏感。此外,BKV与从内质网(ER)提取的膜相互作用,并通过添加布雷费尔丁A阻断感染,布雷费尔丁A干扰从内质网上到高尔基体的转运。这些数据表明,BKV使用神经节苷脂GT1b和GD1b作为受体,并通过内质网到达细胞核。

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数字

图1。
图1。
在人红细胞(RBC)膜存在下浮选BKV。(A) BKV与BSA、RBC膜或用蛋白酶K(PK)处理的RBC膜孵育,在蔗糖梯度上离心,分馏,印迹,并探测VP1的存在。(B) 蛋白凝胶显示PK完全消化。指示数量的红细胞样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并用胶体蓝染色。(C) 用神经氨酸酶处理或未处理的红细胞膜孵育BKV,并按A组进行分析。
图2。
图2。
BKV结合GD1b和GT1b。(A) 浮选试验中使用的神经节苷脂的结构。(B) 用含有GM1、GD1b或GT1b的缓冲液、脂质体或脂质体培养BKV,并按照图1图例所述进行分析。
图3。
图3。
GD1b和GT1b允许BKV感染LNCaP细胞。LNCaP细胞预先用含有神经节苷脂GM1、GM2、GM3、GD1a、GD1b或GT1b的培养基或无神经节苷酯的培养基(模拟)培养,并以5ffu/细胞的MOI感染BKV或SV40。感染后5天提取的总共25μg蛋白质用于分析TAg或GAPDH的表达,作为负荷对照。箭头表示即使在模拟感染细胞中检测到的背景带。
图4。
图4。
BKV与ER的相互作用。(A)用BFA处理HPTE细胞,并以5ffu/细胞的MOI感染BKV。如图3图例所示,分析感染后48小时提取的蛋白质。(B) BKV与BSA或ER膜孵育,并按照图1图例所述进行分析。模拟未感染细胞裂解物。

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引用人

工具书类

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