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.2005年9月13日；102(37):13331-6.
doi:10.1073/pnas.0506578102。 Epub 2005年9月2日。

PDZK1在肾刷状缘离子交换器膜表达中的作用

R布伦特·汤姆森 1, 王彤（Tong Wang）, 本杰明·汤姆森, 路易斯·塔拉特, 阿德里安娜·吉拉迪, 苏安·曼通, 马诺切·索莱马尼, 奥利维尔·科彻, 彼得·阿伦森
附属公司

PDZK1在肾刷状缘离子交换器膜表达中的作用

R布伦特·汤姆森等。 美国国家科学院程序. .

摘要

Na-H交换器NHE3和Cl-离子交换器CFEX（SLC26A6，PAT1）在哺乳动物肾脏近端小管中Na和Cl的再吸收中起主要作用。NHE3和CFEX定位于近曲小管刷状缘并维持在刷状缘的机制目前尚不清楚。为了研究NHE3和CFEX与PDZ域支架蛋白PDZK1的可能相互作用，我们对GST融合蛋白和天然刷状缘膜蛋白进行了一系列体外相互作用测定。这些研究表明，NHE3和CFEX不仅能够直接与PDZK1相互作用，而且这种相互作用是通过其C末端PDZ相互作用位点介导的。为了确定PDZK1相互作用是否对NHE3和CFEX在体内的刷状边界定位至关重要，我们通过Western分析和免疫细胞化学方法检测了野生型和PDZK1-缺失突变小鼠肾脏中NHE3与CFEX的表达。这些研究表明，尽管NHE3的刷状边界表达不受PDZK1缺失的影响，但CFEX的表达显著降低。最后，我们检测了CFEX的功能活性，如刷状缘膜囊泡中的氯氧合物交换和微灌注近端小管中草酸刺激的体积吸收。与观察到的CFEX蛋白表达减少一致，在PDZK1阴性动物中，CFEX功能活性的两个测量值均显著降低。总之，支架蛋白PDZK1对哺乳动物肾脏近端小管中氯离子交换器CFEX的正常表达和功能至关重要。

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数字

图1。
图1。
体外NHE3与PDZK1的相互作用。(一)兔肾BBMV中NHE3的GST-PDZK1下拉的Western分析。1巷，GST-下拉；车道2，GST-PDZK1下拉。用抗NHE3抗体3H3对通道1和通道2进行检测。Ponceau蛋白染色证实GST和GST-PDZK1被拉下。(B类)完整和截断的C末端GST-NHE3融合蛋白的GST-PDZK1覆盖层的Western分析。泳道1，fp131-T，兔NHE3的截短的C末端131aa；通道2，fp131，兔子NHE3的完整C端子131 aa。用抗PDZK1抗体OK-66检测第1和第2通道。
图2。
图2。
体外CFEX与PDZK1的相互作用。(一)兔肾BBMV中PDZK1的GST-CFEX下拉的Western分析。1巷，GST-CFEX fp185下拉；车道2，GST下拉。用抗PDZK1抗体OK-66检测第1和第2通道。Ponceau蛋白染色证实GST和GST-CFEX fp185的下调。(B类)完整和截断的C末端GST-CFEX融合蛋白的GST-PDZK1覆盖层的Western分析。通道1，fp185，小鼠CFEX的C端185 aa完好无损；通道2，fp185-T，鼠标CFEX的截断C端子185 aa。用抗PDZK1抗体OK-66探测泳道1和2。
图3。
图3。
PDZK1阴性和野生型小鼠肾微粒体的Western分析。微粒体由三只野生型和三只敲除成年动物制备而成。(顶部)用抗PDZK1抗体OK-66进行检测。(中部)用抗NHE3抗体3H3进行检测。(下部)用抗CFEX抗体进行检测。
图4。
图4。
NHE3和PDZK1在PDZK1-缺失和野生型小鼠肾皮质中的免疫定位。(一)用抗PDZK1抗体OK66检测野生型肾脏。(B类)用抗NHE3抗体2B9探测野生型肾脏。(C类)用抗PDZK1抗体OK66检测PDZK1-肾缺失。(D类)用抗NHE3抗体2B9探测PDZK1无效肾脏。
图5。
图5。
CFEX在PDZK1-缺失和野生型小鼠肾皮质中的免疫定位。(一)用抗CFEX抗体检测野生型肾脏。(B类)PDZK1-用抗CFEX抗体探测无效肾。(C类和D类)的相位对比图像一和B类分别是。星号表示近端小管。
图6。
图6。
肾近端小管Cl-–PDZK1-null和野生型小鼠的草酸交换活性。(一)从PDZK1-null分离的BBMV中氯刺激草酸摄取(PDZK1项目-/-)和野生型(PDZK1项目+/+)小鼠肾脏。氯我>氯离子o个和Cl我=氯o个，分别表示存在或不存在向外定向的30 mM氯化物梯度。数值为平均值±SE。星号表示学生的t吨测试，P（P）< 0.05. (B类)草酸盐刺激的液体吸收(J型V（V）)PDZK1阴性和野生型小鼠肾脏的微灌注近端小管。“+和-草酸盐”分别表示腔灌流液中存在或不存在1μM草酸盐。数值为平均值±SE.n，灌注小管数量；每组使用三到五只动物的肾脏。星号表示学生的t吨测试，P（P）< 0.05.
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