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.2004年12月15日;10(24):8284-92.
doi:10.1158/1078-0432.CCR-04-1289。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的人结肠癌细胞凋亡被Bcl-2抑制,但被小分子Bcl-2抑制剂HA 14-1恢复

附属公司

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的人结肠癌细胞凋亡被Bcl-2抑制,但被小分子Bcl-2抑制剂HA 14-1恢复

弗兰克·A·辛尼科普等。 临床癌症研究. .

摘要

目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是一种很有前途的抗癌剂,可诱导多种肿瘤细胞类型的凋亡,同时保留大多数正常细胞。我们测定了异位Bcl-2表达对TRAIL诱导的细胞凋亡的影响,以及小分子Bcl-2抑制剂HA14-1是否可以增加TRAIL敏感性。

实验设计:将PC3-Bcl-2质粒或载体单独稳定转染SW480人结肠癌细胞。用重组人TRAIL+/-HA14-1或caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)培养细胞。通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素标记和DNA片段化因子45(DFF45)切割分析细胞凋亡。还研究了克隆存活率。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活化通过免疫印迹或比色法测定。通过免疫印迹法测定Bid、Bax和XIAP的细胞溶质表达以及细胞色素c和Smac/DIABLO的释放。

结果:Bcl-2过表达部分保护SW480细胞免受TRAIL剂量依赖性诱导凋亡的影响,caspase-9抑制剂也是如此,并增加其克隆形成存活率。Bcl-2过表达减弱了TRAIL诱导的caspase-8的裂解,表明其在线粒体上游和下游激活,以及Bid和caspase-3的裂解。Bcl-2抑制TRAIL诱导的Bax易位、细胞色素c和Smac/DIABLO的细胞溶质释放以及XIAP和DFF45的下游裂解。HA14-1和TRAIL的联合给药通过恢复Bax的重新分布和细胞色素c的释放增加了SW480/Bcl-2细胞的凋亡。

结论:Bcl-2通过抑制线粒体扩增步骤和使SW480细胞下游XIAP失活,赋予TRAIL抗凋亡作用。HA14-1逆转了Bcl-2介导的TRAIL耐药,这表明在Bcl-2过度表达的结肠癌中增加TRAIL敏感性的新策略。

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