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.2002年3月18日；195(6):759-70.
doi:10.1084/jem.20011911。

多梳组基因rae28是维持造血干细胞活性所必需的

Hideaki Ohta公司 1, 秋叶昭哉, 金智佑（Ji Yoo Kim）, Sadao Tokimasa公司, 西口正二, R基思·汉弗莱斯, 原纯一, Takihara吉弘
附属公司

多梳组基因rae28是维持造血干细胞活性所必需的

Hideaki Ohta公司等。 实验医学杂志. .

摘要

rae28基因（rae28）也称为mph1，是果蝇多同源基因（Polycomb group genes，PcG）的哺乳动物同源基因。rae28构成PcG复合体1，用于维持转录状态，这些转录状态可能是通过调节染色质结构而启动的。rae28缺陷动物（rae28-/-）的胎肝造血活性受损，胚胎发育期间多系造血祖细胞逐渐减少，脾脏集落形成单位（CFU-S（12））扩张不良。体外长期培养启动细胞试验表明造血干细胞（HSCs）减少，这一点在体内通过致死性辐照同种受体小鼠的重建实验得到证实。竞争性的重组单位（CRU）反映了支持多系血细胞生产的HSC。CRU生成，而胎肝CRU数量减少了20倍。我们还进行了一系列移植实验，以半定量测量CRU在体内的自我更新活性。CRU的自我更新活性在rae28-/-中下降了15倍。因此，推测受损的HSC会降低胎肝中的造血活性。这是第一份表明rae28在维持HSC活性以维持造血方面发挥关键作用的报告。

PubMed免责声明

数字

图1。
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的表达式雷28在造血组织和纯化的胎肝和骨髓细胞亚群中。从造血组织和分馏细胞中提取的总RNA制备PCR-扩增的总cDNA，并通过Southern blot分析和雷28探查。请注意雷28在Lin中检测到表达−，Sca-1+亚群体。BM，骨髓；FL，胎肝；全胎肝或骨髓细胞；林−，Sca-1+，林−，Sca-1+胎儿肝脏和骨髓细胞的亚群。β-肌动蛋白的表达表明过滤器上的cDNA数量相等。
图2。
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外周血细胞和脾脏。（A） 外周血细胞计数。这些数据表示来自至少三个独立个体的平均值和SD。（B） 脾脏+/+、野生型和−/−的图片，雷28 − / −老鼠。
图2。
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外周血细胞和脾脏。（A） 外周血细胞计数。这些数据表示来自至少三个独立个体的平均值和SD。（B） 脾脏+/+、野生型和−/−的图片，雷28 − / −老鼠。
图3。
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（A） CFU-C在胚胎发育期间的扩张。用甲基纤维素法检测12.5~18.5dpc胚胎胎肝中CFU-C的数量。这些数据代表了至少五个人的CFU-Cs平均数，并带有SD。BFU-E和CFU-E均显示为红细胞集落。注意，CFU-C（包括CFU-mix、CFU-GM和BFU-E/CFU-E）的扩张在雷28 − / −14.5dpc后胚胎。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B）CFU-S扩建12在胚胎发育期间。数据表示CFU-S的平均值12从至少五个受试者中确定带有SD的菌落数。放大面板显示CFU-S的数量1212.5dpc胎肝细胞。CFU-S数量12已经降低到12.5 dpc，并且在胎儿发育期间其扩张在雷28 − / −.黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −.（C）CFU-S图片12聚居地。胎儿肝细胞（4×105)给亚致死剂量照射的小鼠注射CFU-S12用Telleyesniczky溶液固定后计数。CFU-S的大小和数量12年菌落减少雷28 − / −.+/+，野生型；−/−，雷28 − / −（D）14.5 dpc胎肝中LTC-IC的数量。在S17饲养层细胞上培养胎肝细胞2周和3周，并对培养的细胞进行甲基纤维素测定。该数据表示CFU-C菌落数的平均值，SD由至少五个人测定。该数字被认为反映了培养期间LTC-IC的频率和扩展。注意，与2周培养相比，3周培养中LTC-IC的降低更为严重。白色方形，野生型；黑色方块，雷28 − / −.
图3。
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（A） CFU-C在胚胎发育期间的扩张。用甲基纤维素法检测12.5~18.5dpc胚胎胎肝中CFU-C的数量。这些数据代表了至少五个人的CFU-Cs平均数，并带有SD。BFU-E和CFU-E均显示为红细胞集落。注意，CFU-C（包括CFU-mix、CFU-GM和BFU-E/CFU-E）的扩张在雷28 − / −14.5dpc后胚胎。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B）CFU-S扩建12在胚胎发育期间。数据表示CFU-S的平均值12从至少五个受试者中确定带有SD的菌落数。放大面板显示CFU-S的数量1212.5dpc胎肝细胞。CFU-S数量12已经降低到12.5 dpc，并且在胎儿发育期间其扩张在雷28 − / −.黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −.（C）CFU-S图片12聚居地。胎儿肝细胞（4×105)给亚致死剂量照射的小鼠注射CFU-S12用Telleyesniczky溶液固定后计数。CFU-S的大小和数量12年菌落减少雷28 − / −.+/+，野生型；−/−，雷28 − / −（D）14.5 dpc胎肝中LTC-IC的数量。在S17饲养层细胞上培养胎肝细胞2周和3周，并对培养的细胞进行甲基纤维素测定。该数据表示CFU-C菌落数的平均值，SD由至少五个人测定。该数字被认为反映了培养期间LTC-IC的频率和扩展。注意，与2周培养相比，3周培养中LTC-IC的降低更为严重。白色方形，野生型；黑色方块，雷28 − / −.
图3。
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（A） CFU-C在胚胎发育期间的扩张。用甲基纤维素法检测12.5~18.5dpc胚胎胎肝中CFU-C的数量。这些数据代表了至少五个人的CFU-Cs平均数，并带有SD。BFU-E和CFU-E均显示为红细胞集落。注意，CFU-C（包括CFU-mix、CFU-GM和BFU-E/CFU-E）的扩张在雷28 − / −14.5dpc后胚胎。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B）CFU-S扩建12在胚胎发育期间。数据表示CFU-S的平均值12从至少五个受试者中确定带有SD的菌落数。放大面板显示CFU-S的数量1212.5dpc胎肝细胞。CFU-S数量12已经降低到12.5 dpc，并且在胎儿发育期间其扩张在雷28 − / −.黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −.（C）CFU-S图片12聚居地。胎儿肝细胞（4×105)给亚致死剂量照射的小鼠注射CFU-S12用Telleyesniczky溶液固定后计数。CFU-S的大小和数量12年菌落减少雷28 − / −.+/+，野生型；−/−，雷28 − / −（D）14.5 dpc胎肝中LTC-IC的数量。在S17饲养层细胞上培养胎肝细胞2周和3周，并对培养的细胞进行甲基纤维素测定。该数据表示CFU-C菌落数的平均值，SD由至少五个人测定。该数字被认为反映了培养期间LTC-IC的频率和扩展。注意，与2周培养相比，3周培养中LTC-IC的降低更为严重。白色方形，野生型；黑色方块，雷28 − / −.
图3。
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（A） CFU-C在胚胎发育期间的扩张。用甲基纤维素法检测12.5~18.5dpc胚胎胎肝中CFU-C的数量。这些数据代表了至少五个人的CFU-Cs平均数，并带有SD。BFU-E和CFU-E均显示为红细胞集落。注意，CFU-C（包括CFU-mix、CFU-GM和BFU-E/CFU-E）的扩张在雷28 − / −14.5dpc后胚胎。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B）CFU-S扩建12在胚胎发育期间。数据表示CFU-S的平均值12从至少五个受试者中确定带有SD的菌落数。放大面板显示CFU-S的数量1212.5dpc胎肝细胞。CFU-S数量12已经降低到12.5 dpc，并且在胎儿发育期间其扩张在雷28 − / −.黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −.（C）CFU-S图片12聚居地。胎儿肝细胞（4×105)给亚致死剂量照射的小鼠注射CFU-S12用Telleyesniczky溶液固定后计数。CFU-S的大小和数量12年菌落减少雷28 − / −.+/+，野生型；−/−，雷28 − / −（D）14.5 dpc胎肝中LTC-IC的数量。在S17饲养层细胞上培养胎肝细胞2周和3周，并对培养的细胞进行甲基纤维素测定。该数据表示CFU-C菌落数的平均值，SD由至少五个人测定。该数字被认为反映了培养期间LTC-IC的频率和扩展。注意，与2周培养相比，3周培养中LTC-IC的降低更为严重。白色方形，野生型；黑色方块，雷28 − / −.
图4。
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致死性照射的同种小鼠移植胎肝细胞后的Kaplan-Meier生存曲线。胎儿肝细胞（4×105)将由14.5-dpc胚胎制备的胚胎注射到同种受体小鼠中，并在常规设施中研究小鼠的存活率。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −.
图5。
图5。
竞争性再种群分析。（A） 胎肝CRU的频率。检测注射了14.5-dpc胎肝细胞的同种受体小鼠的外周血细胞，以评估HSC的长期重建能力。移植后3个月，EGFP>1%的小鼠比例+细胞用于计算CRU的频率。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B和C）系列移植实验。用包括20个CRU在内的胎肝细胞注射致死性辐照受体小鼠，并在注射后1个月通过CRU分析测定主要受体小鼠的CRU频率。从野生型和雷28 − / −细胞分别根据图B和图C计算。注意，图上一栏中所示的注入细胞数量在图B和图C之间相差10倍。
图5。
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竞争性再种群分析。（A） 胎肝CRU的频率。检测注射了14.5-dpc胎肝细胞的同种受体小鼠的外周血细胞，以评估HSC的长期重建能力。移植后3个月，EGFP>1%的小鼠比例+细胞用于计算CRU的频率。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B和C）系列移植实验。用包括20个CRU在内的胎肝细胞注射致死性辐照受体小鼠，并在注射后1个月通过CRU分析测定主要受体小鼠的CRU频率。从野生型和雷28 − / −细胞分别根据图B和图C计算。注意，图上一栏中所示的注入细胞数量在图B和图C之间相差10倍。
图5。
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竞争性再种群分析。（A） 胎肝CRU的频率。检测注射了14.5-dpc胎肝细胞的同种受体小鼠的外周血细胞，以评估HSC的长期重建能力。移植后3个月，EGFP>1%的小鼠比例+细胞用于计算CRU的频率。黑色方形，野生型；黑色圆圈，雷28 − / −（B和C）系列移植实验。用包括20个CRU在内的胎肝细胞注射致死性辐照受体小鼠，并在注射后1个月通过CRU分析测定主要受体小鼠的CRU频率。从野生型和雷28 − / −细胞分别根据图B和图C计算。注意，图上一栏中所示的注入细胞数量在图B和图C之间相差10倍。
图6。
图6。
胎儿肝细胞的细胞周期状态。细胞在收获后用10μg/ml BrdU脉冲标记，用PI染色，并接受FACS®分析。野生型和雷28 − / −胎儿肝细胞如图所示。+/+，野生型；−/−，雷28 − / −.
图7。
图7。
a和b聚集的表达式霍克斯基因（A）和与造血有关的受体、信号分子和转录因子（B）的基因。p16、p19和p21基因的表达也如图所示。从14.5dpc的胎儿肝细胞中制备PCR扩增的总cDNA，并通过Southern印迹分析分析基因的表达。β-肌动蛋白的表达显示为内部标记，以确认过滤器上的cDNA数量相等。+/+，野生型；−/−，雷28 − / −.
图7。
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a和b聚集的表达式霍克斯基因（A）和与造血有关的受体、信号分子和转录因子（B）的基因。p16、p19和p21基因的表达也如图所示。从14.5dpc的胎儿肝细胞中制备PCR扩增的总cDNA，并通过Southern印迹分析分析基因的表达。β-肌动蛋白的表达显示为内部标记，以确认过滤器上的cDNA数量相等。+/+，野生型；−/−，雷28 − / −.
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