关于NICE-NIH壁内CryoEM联盟
NICE是NCI、NIAID、NIEHS、NICHD、NIDCR、NEI和NIA的内部调查员可用的资源。我们的设备提供了最先进的Titan Krios冷冻电子显微镜，用于使用单粒子或冷冻层析方法对蛋白质、大分子复合物和受体、细胞器、感染性病原体进行原子再溶结构测定。通过电子显微照片计算出的精细的3D地图在癌症研究、疫苗设计、细胞发育以及人体生理和功能研究中引发了众多生物学见解。
除了高分辨率数据收集服务外，我们的显微镜医生还为我们的内部受训人员提供冷冻标本制备和图像处理方面的技术咨询和指导。我们很自豪能成为一个联合的全球合作组织的成员，该组织提供尖端的显微镜访问，并与美国国立卫生研究院结构生物学界分享我们的专业知识，以提高我们在生命科学方面的知识。
NICE咨询委员会
董事：Jenny Hinshaw博士（NIDDK）
副主任：Joseph Macrotrigiano博士（NIAID）
副主任：Di Xia博士（NCI）
合作者
NCI公司-白亚文、李京、凯莉·沃尔特斯、迪霞、张平、郑托马斯
NIEHS公司-马里奥·博格尼亚、比尔·科普兰、罗尔·沙珀、罗宾·斯坦利、斯科特·威廉姆斯
NIAID公司-奥黛丽·哈里斯（Audrey Harris）、约瑟夫·麦克罗特里亚诺（Joseph Macrotrigiano）、大卫·马古利斯（David Margulies）、彼得·孙（Peter Sun）、尼拉杰·托利亚（Niraj Tolia）
NIAID-VRC公司-Peter Kwong、John Mascola、Mario Roederer
NICHD公司-阿尼本·班纳吉、多琳·马提斯、约书亚·齐默伯格
NIDCR公司-杰伊·乔里尼（Jay Chiorini）、纳丁·萨马拉（Nadine Samara）
国家执行局-丽莎·哈特内尔
NIH IRP CryoEM设施（NICE）所属NCI Krios的操作程序和政策Rick Huang，博士，NICE咨询委员会审核4-15-2022
- 目标：
- 为NIH内部项目的结构生物学家服务
- 提供Titan Krios上高分辨率EM数据采集的访问权限，而不是用于筛选
- 提供T12上的初始样本筛选。
- 会议：
- Krios范围时间分为会话。典型的会议时间为3天：周一至周日和周四至周四。
- Krios示波器将在每个周日下午晚些时候进行冷冻循环，以清除示波器中的污染物。
- 数据收集：
- 强烈建议每个会话使用一个数据集，以获得最佳效率和结果。
- 可以在一次会话中收集2-3个过夜数据集（相同的成像条件，但处于不同的蛋白质复合物、状态或药物结合底物）。用户需要将此请求包含在提案中，或至少提前2周通知设施工作人员。
- 每月保留一次会议，用于设施内部测试、定期维护、显微镜校准或需要时的服务。
- 用户必须收集其提案中规定的样品。禁止对未经批准的项目进行任何更改，并可能导致取消。
- 在用户同意的不太可能出现“无望”样本（蛋白质质量差）的情况下，将终止数据收集。
- 特殊要求：
- 我们的显微镜目前已针对剂量对称断层扫描、SPA标准采集、带图像偏移的多快照和倾斜SPA（高达+45度）进行了优化。当数据收集需要新的方法或功能时，请在建议书中包含该请求，或至少提前4周通知设施工作人员。例如，安装新版本的serialEM或尚未提供的新数据收集方法。
- 错误报告：
- 硬件或软件错误：遇到任何硬件或软件故障时，所有用户必须关闭“柱阀“并立即报告事件。请不要试图清除任何重大错误消息，因为设施工作人员需要记录具体错误并将其报告给服务工程师以进行故障排除。
- 对于轻微错误消息，高级用户应记录屏幕截图并记录事件的日期和时间。
- 网格加载和筛选：
- 网格剪裁和加载
- 鼓励用户提前剪裁网格。
- 设施工作人员或高级用户可以在会议当天（星期一或星期四）剪辑网格。
- 设施工作人员在为期3天的课程中只能剪辑约4个网格（必要时最多8个）。
- 最多可以将11个预先剪裁的网格加载到自动加载器中。
- 强烈建议不要在会话期间重新加载磁带。
- 只有经验丰富的高级用户才能将网格加载到磁带中。
- 网格筛选很重要
- 重网格筛选，例如检查自动装弹机中的所有11个网格并重新装弹被禁止，这可能导致取消。
- 筛查预计在第1天早上完成。用户在下午继续筛选网格表明，该样本尚未通过筛选显微镜进行检查。
- 所有用户都应该优先选择网格。可以快速进行系统/计划筛选，以确保数据质量，例如具有不同条件的网格。
- 用户类型：
- 所有用户
- 不允许在夜间、周末或节假日加载或更改网格。 NIH工作时间外，员工支持和现场工程师将无法进行故障排除。
- 所有用户都可以随时使用远程桌面应用程序添加更多目标。
- 初学者
- 初学者被定义为第一次或不经常使用的用户。设施工作人员将全面协助数据收集。设施工作人员将向用户展示程序并提供必要的培训。用户只能选择数据收集的目标。
- 会议期间，设施工作人员必须与初学者在控制室。
- 中级
- 中间人被定义为经验丰富、经常使用的人，例如至少每月在Krios上使用一次，每周在筛查显微镜上使用一个。
- 中间用户可以控制数据采集的设置。设施工作人员将进行显微镜校准，并在需要时提供帮助。
- 当中间用户设置数据采集以防硬件故障时，校园内必须至少有一名设施工作人员。
- 高级
- 高级用户是指多年来收集NCIbuilding 37 Krios数据并对显微镜和摄像系统有充分了解的频繁用户。
- 高级用户可以完全控制设置数据采集和正常显微镜校准（仅限直接校准）。
- 如果需要更改任何高级范围/摄像头设置，请与设施工作人员确认以供批准。
- 高级用户必须在会话结束时将范围/摄像头设置恢复为原始设置。
- 会话时间表：
- 时间以会话为单位授予用户。一次授予用户的会话不得超过两次。
- 显微镜检查将提前1-2个月安排。用户必须提交一份提案以请求每个范围会话。提案由NICE咨询委员会审查。
- 计划日历将可供用户访问（仅限查看）。
- NCI用户可以请求加入“待命名单”。如果有任何突然取消，时间将授予待机列表中的用户，用户应准备好样品，并在时间允许时准备加载。
- 如果样本被确定为“无望”，则设施有权取消会话，然后将剩余时间留给待命列表中的用户。例如，冰非常薄或非常厚，没有颗粒，尺寸错误的颗粒，水晶冰……等等。
- 由于意外的硬件故障导致会话取消，会话将被重新安排到下一个周期中最早的时间，或被置于待机列表的顶部，以便将等待时间降至最低。
- 出版和作者：
- 手稿中的确认
- 如果在NCI-Bdg37 Krios上收集数据，则需要在手稿中确认。
- 例子：
- 我们要感谢Rick Huang博士在低温EM数据收集方面的帮助。 这项工作利用了NCI/NICE Cryo-EM设施。 2020-08-01至2022-08-01
- 我们要感谢Allison Zeher女士和Rick Huang博士在低温EM数据收集方面的帮助。这项工作利用了NCI/NICE Cryo-EM设施。
- 与合著者合作
- 除数据收集外，还应授予参与工作的设施工作人员著作权。
- 数据收集需要特殊的定制或测试新方法。
- 在数据处理方面协助和咨询用户。
- 提供样品制备、故障排除和样品优化方面的有用建议。