1.简介

油下微批结晶（Chayen等人。, 1990)是一种广泛使用且稳健的蛋白质结晶方法。在这种方法中，将纳米升的蛋白质和沉淀剂滴入结晶托盘的各个孔中，然后用液体石蜡油或石蜡和硅油的混合物覆盖（Chayen，1997, 1998; 达西等人。, 2004, 2003). 结晶液滴中的水通过液态油层慢慢蒸发，导致蛋白质和沉淀剂的浓度增加，这通常会产生蛋白质晶体。

该方法的一个显著缺点是，在实验完成后的几周内，水滴溶液完全干燥。过度干燥通常会导致盐层的形成，导致蛋白质晶体的分解，并伴随衍射能力的损失。下面我们描述了一个简单的程序，它允许控制蒸发速度并防止水滴变干。

关键创新是在微滴结晶托盘中加入了一个储水器（图1). 通过适当选择储液罐内溶液的蒸汽压力，可以控制微滴的蒸发速度，并消除其干燥的风险。

图1 道格拉斯蒸汽分批疏水结晶板。结晶液滴在油下被分配到板的中心部分的井中。油滴上方托盘内的湿度由储液罐中液体的蒸汽压力决定。

2.方法

2.2. 液滴体积测量

在每个盘子中，分配48滴。为了跟踪蒸发随时间的变化，在所有托盘中的相同位置选择八个液滴进行监测。使用配备XR12透镜的奥林巴斯显微镜测量其直径，放大倍数为×90。使用显微镜标尺测量液滴的水平直径（图2)假设液滴是球形的。通过测量其初始直径，使用公式计算体积，证明了该假设的有效性五= (4/3)π第页^三，并将此计算体积与分配的体积进行比较。每天测量液滴直径，持续14天。将平板保持在295 K，外部湿度为65–75%。

图2 结晶板井中油下的结晶液滴图像。测量的液滴直径用双头箭头表示。

3.结果

图3显示了储液罐中溶液在不同蒸汽压力条件下计算出的液滴体积的下降率数据清楚地表明，改变储液器中水溶液的盐浓度，从而改变蒸汽压，显著地改变液滴体积的下降速率。盐浓度越低，蒸汽压越高，体积下降率越低。水库中有水时，可以有效地在长达两年的时间内完全防止水滴的浓缩，在这种情况下，水滴中的晶体保持其完整性和衍射能力。在一些实验中，托盘用副膜包裹，但这对蒸发速度没有影响（未显示）。

图3 结晶液滴脱水。结晶体积随时间而下降。每个点代表八个结晶液滴的平均直径。1的标准偏差σ通常低于计算体积的15%（未显示）。

4.讨论

所提供的实验数据明确表明，通过调节结晶托盘内的蒸汽压力，可以控制油程序下微容器中液滴体积的下降速度。这是通过向托盘周围的储液罐中添加所需浓度的盐溶液来实现的。尽管这些储存器最初旨在包含覆盖结晶液滴的过量油，但它们也被证明可用于其他目的，例如在逆转录病毒衣壳蛋白结构域结晶方案中用作2-丙醇的储存器（Mortuza等人。, 2004)。

该技术允许调节晶体形成和生长的速率，因为可以通过降低盐浓度并同时提高蒸汽压来尽可能多地降低浓缩速率。该技术的另一个优点是能够完全阻止蒸发，从而消除干燥的风险，干燥会导致晶体分解，从而导致衍射能力的损失。

在储液罐中含有蒸馏水的实验中，油内和塑料表面上的小水滴（～0.01–0.05µl）冷凝产生了一种不良的人造物。这可能是由于温度波动，或者更有可能是由于蒸馏水的高蒸汽压。使用低至0.5的盐浓度可以避免这种人为现象M（M）氯化钠。

综上所述，上述新方法提供了一种方法，用于控制油程序下批次结晶液滴中溶剂的蒸发速度，并避免液滴长时间干燥。