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同步辐射源、光束线光学和探测器的最新进展正在推动室温数据采集的复兴。潜在的推动力是认识到,在数据收集过程中,使用环境温度而非低温下保存的晶体确定的结构的功能重要区域中观察到了构象差异。此外,室温测量可以进行时间分辨研究,无需寻找合适的冷冻保护剂。由于辐射损伤限制了可以从单晶获得的高分辨率数据,特别是在室温下,因此通常使用多个晶体以串行方式收集数据,以将总剂量分布在整个系综上。多年来,已经开发了几种方法来有效地交换晶体以进行室温数据采集。这些包括就地收集在托盘、芯片和毛细管支架中。在这里,演示了使用缓慢流动的微观流进行晶体输送,从而将晶体输送到X射线束中的吞吐量极高。这种自由流技术最初是为X射线自由电子激光器的串行飞秒晶体学而开发的,现在已被用于同步加速器的串行晶体学。通过将晶体嵌入高粘度载流中,可以使用未衰减的X射线束在大气压力下进行高分辨率室温研究,从而允许分析微小或弱散射晶体。本文描述了高粘度挤压注射器,以及它在瑞士光源使用不到半毫克的蛋白质晶体从天然和重原子衍生溶菌酶晶体中收集高分辨率串行数据的用途。室温串行数据允许从头开始结构确定。此验证原理实验中使用的晶体尺寸由可用的通量密度决定。然而,光束线光学、探测器和同步辐射源的未来发展将使真正的微晶得以使用。这种高通量、高分辨率的方法为研究环境温度下大分子的结构和动力学提供了一条新的途径。

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用于计算实验参数的电子表格工具

PDB参考:溶菌酶,4rlm;第4轮


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