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X射线诱导的氧化还原变化可能导致金属蛋白晶体中金属功能状态的错误分配。随着强同步辐射X射线束的使用,在蛋白质晶体学实验期间在线监测金属离子(和其他生色团)状态的需要变得越来越重要。因此,全世界正在作出重大努力,将不同的分光镜与X射线晶体学数据收集相结合。本文描述了达斯伯里SRS实验室现代大分子晶体学(MX)光束线10上光学和X射线吸收光谱的实施和应用。该光束线配备了专用单片能量色散X射线荧光探测器,可以进行X射线吸收光谱(XAS)测量就地在记录衍射数据的同一个晶体上。此外,在光束线上加入了光学显微分光光度计,从而促进了MX、XAS和光学光谱的组合测量。通过结合这些技术,还可以同时监测晶体中光学活性和光学沉默金属中心的状态。这种独特的能力已用于观察亚硝酸盐还原酶晶体的晶体学数据采集结果产碱木糖氧化酶类,其同时包含1型和2型Cu中心。结果发现,1型铜中心的光还原速度很快,导致光谱中595nm峰的损失,而2型铜中心在更长的时间内保持氧化状态,XAS数据对其进行了独立确认,因为该中心的光谱几乎无法用显微分光光度法检测到。这个例子清楚地证明了使用两种在线方法(光谱学和XAS)在晶体学数据收集期间识别金属蛋白的明确氧化还原状态的重要性。

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