黑色素瘤细胞系对BRAF公司^V600E型特异性Raf抑制剂PLX4032的突变

摘要

阻断由BRAF公司^V600E型突变是一种很有前途的黑色素瘤治疗方法。我们测试了Raf蛋白激酶特异性抑制剂PLX4032/RG7204在黑色素瘤细胞系中的抗肿瘤作用。PLX4032仅在具有BRAF公司^V600E型突变。十分之七BRAF公司^V600E型根据细胞活力测定，突变细胞株表现出敏感性，其中三株在浓度高达10μM时具有耐药性。在敏感细胞系中，有4个对IC高度敏感₅₀值低于1μM，其中三个对IC中度敏感₅₀值介于1至10μM之间。在敏感和耐药细胞系中都有MAPK通路抑制和细胞周期阻滞的证据。通过测序进行基因组分析，通过质谱对近400个致癌突变进行基因分型，以及SNP阵列显示在BRAF公司敏感和耐药细胞系之间的位点扩增或其他致癌事件。然而，代谢示踪剂摄取研究表明，与耐药细胞系相比，敏感细胞系在接触PLX4032后对FDG摄取的抑制更为深刻。总之，BRAF公司^V600E型突变黑色素瘤细胞系对PLX4032表现出一系列敏感性，使用PET探针的代谢成像可用于评估敏感性。

背景

对黑色素瘤致癌事件的进一步了解表明，大多数突变激活了丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路[1,2]. MAPK途径中最常见的突变是BRAF公司基因，存在于60-70%的恶性黑色素瘤中[三].美国国家科学院大约15%的黑色素瘤发生突变[1,4,5]和相互排斥BRAF公司突变[6,7]. The majority of mutations inBRAF公司由胸腺嘧啶核苷到腺苷的单核苷酸颠倒导致谷氨酸在600位取代缬氨酸（称为BRAF公司^V600E型) [三,4,8]与野生型蛋白激酶相比，其活性增加了500倍[8].

PLX4032（也称为RG7204）被开发为Raf的特异性抑制剂。它是临床前测试的PLX4720的类似物[9]. PLX4720在13 nM时抑制突变的B-Raf激酶，而野生型激酶需要10倍的高浓度（160 nM）[9]从而预测高特异性BRAF公司^V600E型突变细胞系。突变激酶这种特异性的基础被认为是优先抑制B-Raf的活性构象。此外，它能进入Raf选择性口袋，因此对大多数其他非Raf激酶具有选择性，而这些非Raf蛋白酶需要100到1000倍的浓度才能抑制激酶。唯一的例外是乳腺肿瘤激酶（BRK），它在130 nM时被抑制，与V600E突变的B-Raf激酶相比，相差一个对数[9].

在当前的研究中，我们分析了一组对PLX4032具有明确致癌改变的人类黑色素瘤细胞系的敏感性。此外，为了开发一种生物标记物来指示靶向治疗的反应，我们研究了一种非侵入性的成像电阻与灵敏度的方法体内我们描述了PLX4032在具有BRAF公司^V600E型突变和正电子发射断层扫描（PET）示踪剂2-氟-2-脱氧-D-葡萄糖（FDG）可用于非侵入性PET成像，以区分敏感和耐药细胞系。

材料和方法

试剂和细胞系

PLX4032（也称为RG7204或RO5185426）是根据与Plexxikon（加利福尼亚州伯克利）签订的材料转移协议（MTA）获得的，并溶解在DMSO（新泽西州莫里斯敦Fisher Scientific）中，浓度为10 mM。SKMEL28是从美国型培养物收藏中心（马里兰州罗克维尔ATCC）获得的，其余的人类黑色素瘤细胞系（M系列）是根据加州大学洛杉矶分校IRB批准号02-08-067从患者的活检中建立的。细胞在RPMI 1640中用含有10%胎牛血清（FBS、Omega Scientific、Tarzana、CA）和1%青霉素、链霉素和两性霉素（Omega科学）的L-谷氨酰胺（Mediatech Inc.，Manassas，VA）培养。使用Mycoalert分析定期测试时，所有细胞系均无支原体（Lonza，Rockland，ME）。

布拉夫^600埃突变分析

使用FlexiGene DNA Kit（加利福尼亚州巴伦西亚Qiagen）提取基因组DNA，并使用Invitrogen在线引物设计（加利福尼亚州Calsbad Invitrogen）通过PCR扩增突变位点两侧的200 bp区域，如下所述[10]. 使用QIAquick PCR纯化试剂盒（Qiagen）纯化PCR产物，测序（加州洛杉矶Laragen Inc.）并与BRAF公司基因(网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov，注册号NT_007914）。

Oncomap 3核心质谱基因分型

样本通过OncoMap 3进行分析，其中查询了33个基因的396个体细胞突变。如前所述，以5 ng/μl的全基因组扩增DNA作为多重PCR的输入[11]. 使用iPLEX-Gold单碱基延伸酶（加州圣地亚哥Sequenom）在2μl反应体积内进行单碱基引物延伸（iPLEX）。将产品树脂化并转移至SpectroCHIPs，以通过MALDI-TOF质谱仪进行分析[11]. 所有突变均通过相关基因片段的直接测序确认。

SNP阵列分析

将从13个人类黑色素瘤细胞株的全组中提取的DNA杂交到Illumina Beadchip human Exon 510S-Duo上（Illuminia Inc.，加利福尼亚州圣地亚哥）。如前所述，使用PennCNV（*）计算DNA拷贝数[12]. 使用Affymetrix GeneChip对八种细胞系（M202、M207、M229、M249、M255、M257、M263、M308）进行了额外分析^®人类地图250K Nsp阵列（Affymetrix，Santa Clara，CA）。

细胞增殖和活性测定

用PLX4032和平行载体对照在给定浓度下对黑色素瘤细胞株进行三次处理120小时。使用四氮唑化合物[3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲基氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四氮唑（MTS）基比色细胞增殖试验测量活细胞（普罗米加，麦迪逊，威斯康星州）使用Vi-Cell系列细胞活力分析仪（Beckman-Colter），在9-12天的时间内，从每24小时测量的重复细胞数中确定细胞系倍增时间。24小时内的加倍时间由公式1/{[（logC2）-（logC1））×3.32]/T}计算，其中C1=初始细胞数，C2=最终细胞数，T=24小时。第3、4、5天的平均值被用作给定实验条件下的最佳倍增时间。

低磷染色

细胞被镀并用1μM PLX4032或载体对照物处理1或20小时，固定在1.6%多聚甲醛中（宾夕法尼亚州哈特菲尔德电子显微镜科学公司），在4°C 100%甲醇中渗透（费希尔科学公司）并用Alexafluor 647-共轭人抗磷-Erk1/2染色（T202/Y204，BD Biosciences，加利福尼亚州圣何塞）在含有0.5%白蛋白牛血清和0.01%叠氮化钠（均来自密苏里州圣路易斯市Sigma-Aldrich）的无菌PBS（Mediatech Inc.）中。在FACSCalibur或FACScan（BD Biosciences）上进行流式细胞术，并使用FlowJo（Tree Star Inc，Asland，or）分析数据。

细胞周期分析

细胞用1μM PLX4032和平行载体对照处理20至120小时，固定在70%乙醇（Pharmco-Aaper，Shelbyville，KY）中，然后再悬浮在含有0.5%牛血清白蛋白、180μL/ml碘化丙啶染色液（BD Biosciences）和来自牛胰腺的50μg/ml核糖核酸酶A（Sigma-Aldrich）的无菌PBS中。在FACSCalibur或FACScan上进行流式细胞术，并使用FlowJo分析数据。

细胞凋亡分析

用浓度增加的PLX4032、DMSO载体对照或1μM的staurosporine作为阳性对照处理黑色素瘤细胞系120小时。按照制造商的说明（BD Biosciences），将细胞胰蛋白酶化并转移到FACS管中，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，并使用FACSCalibur进行流式细胞术分析，如所述[13].

Western印迹

如前所述进行蛋白质印迹[14]. 主要抗体包括p-Akt Ser473和Thr308、Akt、p-S6K、S6K、p-S6 Ser235/236、S6、PTEN、p-ERK Thr204/205、ERK、p-AMPK、AMPK（均来自马萨诸塞州丹弗斯的Cell Signaling Technology）和α-actin（Sigma-Aldrich）。使用ECL试剂盒（Amersham Biosciences Co，Piscataway，NJ）显示免疫反应性。

体外代谢示踪剂吸收试验

10⁴细胞/孔被镀在0.001%聚赖氨酸（Sigma-Aldrich）预孵育过滤器底部96个孔板上（多屏HTS GV 0.22μm不透明，Millipore，Billerica，MA），并休息24小时。三次添加1μM PLX4032和平行车辆控制，持续20小时。用0.5μCi和三种代谢示踪剂中的一种与用作PET示踪剂的类似物孵育细胞1小时：2-FDG[5,6-^三H] （美国放射性标记化学品公司，密苏里州圣路易斯），无葡萄糖DMEM（Invitrogen）或2'-脱氧-2'-氟阿拉伯呋喃糖胞嘧啶-[^三H] 和胸腺嘧啶[甲基-^三H] （FAC和胸苷，Moravek Biochemicals Inc.，Brea，CA）在RPMI 1640中。使用多屏高温超导真空歧管系统（Millipore）冲洗细胞外代谢示踪剂。向每个孔中添加100μL闪烁液（Perkin Elmer，Waltham，MA），并在1450 microta trilux微孔板（Perkin-Elmer）上测量氚计数。

体内microCT和microPET研究

用100 mg/kg PLX4032在玉米油或溶媒对照中经口灌胃给已建立的皮下人黑色素瘤异种移植小鼠治疗3天，每天两次。最后一次治疗是在腹腔注射200μCi前一小时进行的[¹⁸F] -FDG，如前所述，在microPET扫描前，允许其在组织中分布1小时[15].

统计分析

使用配对的Student’st吨-用双尾P值进行测试。

结果

PLX4032特异性阻断黑色素瘤细胞系中MAPK通路BRAF公司^V600E型突变

我们测试了PLX4032在一组人类黑色素瘤细胞系中差异阻断MAPK通路信号的能力（表1)通过使用细胞内磷酸特异性流式细胞术定量B-Raf活性下游靶点磷酸化Erk（pErk）的抑制（图1安培). 正如预期的那样，具有BRAF公司^V600E型突变速度快（1小时可检测到），持续时间长（20小时持续，图1B年)抑制pErk，尽管其中一个细胞系（M263）对pErk的抑制低于其他细胞系美国国家科学院Q61L突变（M202和M207）和两个癌基因的细胞系野生型（M257）。事实上，其中一例患者的pErk信号显著增强美国国家科学院Q61L突变细胞系（M207），这一观察结果与其他被认为是负调控途径缺失的数据一致[16,17]并通过C-Raf增强信号[18,19]. 因此，PLX4032在携带BRAF公司^V600E型突变。

表1人类黑色素瘤细胞系的基因组特征、生长动力学和对PLX4032的敏感性。

图1

PLX4032对MAPK通路和黑色素瘤细胞系活性的调节用1μM PLX4032处理20小时的黑色素瘤细胞系用pErk抗体染色，并通过流式细胞术进行分析。a） 典型的流式细胞术直方图显示了用载体对照物或PLX4032处理的细胞中pErk的荧光强度。b） 10种不同黑色素瘤细胞系pErk变化百分比的比较美国国家科学院/BRAF公司突变状态。c）体外随着PLX4032浓度的增加（0.001-10μM）培养120小时后的细胞活力。使用基于MTS的分析测定细胞活力。

PLX4032的差动灵敏度BRAF公司^V600E型突变黑色素瘤细胞系

不同类型的黑色素瘤细胞系美国国家科学院/BRAF公司处理突变状态在体外PLX4032的浓度范围持续5天。没有的三个细胞系BRAF公司^V600E型突变对PLX4032具有抗性。七BRAF公司^V600E型突变细胞株对PLX4032敏感，包括四个高度敏感的细胞株，其抑制浓度为最大抑制浓度的一半（IC₅₀)值低于1μM。令人惊讶的是，在三种细胞系中BRAF公司^V600E型我们无法确定IC的突变₅₀PLX4032浓度增加至10μM，表明这些细胞系在5天的暴露中对该药剂具有耐药性在体外（图1摄氏度). 在3天存活率分析中，以及每天或在实验开始时向培养物中添加PLX4032时，也获得了类似的结果（数据未显示）。

PLX4032对敏感和耐药细胞周期的抑制作用相似BRAF公司^V600E型突变细胞系

为了研究PLX4032对B-Raf信号下游细胞周期进展的影响，我们使用碘化丙啶流式细胞术染色。正如预期的那样，PLX4032对黑色素瘤细胞系的细胞周期进程没有影响BRAF公司^V600E型突变（图2安培). 相反，PLX4032暴露一小时（数据未显示）或20小时（图2B型和2摄氏度)导致了一次类似且深刻的G1逮捕BRAF公司^V600E型突变细胞系在体外对PLX4032的灵敏度。

图2

PLX4032对细胞周期和凋亡的影响.a-c）黑色素瘤细胞系与1μM PLX4032培养20小时，并用碘化丙啶染色，用于活细胞上的细胞周期分析。a）美国国家科学院Q61L突变体，b）BRAF公司^V600E型抗PLX4032突变体，c）BRAF公司^V600E型对PLX4032敏感的突变体。d-e）黑色素瘤细胞系与1μM PLX4032、载体对照或1μM staurosporine（SSP-诱导凋亡的阳性对照）培养120小时，并用Annexin V和碘化丙啶双重染色，通过流式细胞术分析凋亡细胞死亡。测试包括一个PLX4032抗性细胞系（M233）和一个高灵敏度细胞系（M349），这两个细胞系都是BRAF公司^V600E型突变体。

PLX4032导致敏感细胞凋亡死亡BRAF公司^V600E型但没有抵抗力BRAF公司^V600E型突变黑色素瘤细胞系

然后，我们分析了PLX4032对黑色素瘤细胞系不同诱导凋亡作用的能力BRAF公司^V600E型突变。使用BRAF公司^V600E型根据细胞活性测定，对PLX4032（M249）反应良好的突变黑色素瘤细胞系和对PLX4012（M233）反应较差的突变黑素瘤细胞系，我们基于碘化丙啶和Annexin V的掺入，利用流式细胞术分析了凋亡诱导。PLX4032-治疗后，AnnexinV阳性细胞增加，与反应不良的M233细胞相比，PLX4032应答的M249细胞对碘化丙啶呈双阳性或不呈双阳性（图二维和第二版). M238和M263也获得了类似的结果（数据未显示）。结合细胞周期抑制的数据，这些数据表明PLX4032在BRAF公司^V600E型突变细胞系的反应较差，而在细胞活力测定中，它对PLX4032反应良好的细胞系具有细胞抑制和细胞毒性作用。

的功能和基因组特征BRAF公司^V600E型对PLX4032敏感性不同的突变细胞系

我们测试了对PLX4032敏感性的差异是否是由于显著不同的倍增时间所致。抗性BRAF公司^V600E型与敏感细胞系相比，突变细胞系的加倍时间较慢BRAF公司^V600E型突变细胞系（P=0.24，表1). 缺乏显著性是由于一个小群体中的异常值，最显著的是高度敏感的M262细胞系，其加倍时间接近50小时。有趣的是，所有细胞系都是纯合的BRAF公司^V600E型突变对PLX4032中度至高度敏感，对PLX4012耐药的细胞株均为杂合BRAF公司^V600E型（P=0.16）。然而，也有两种具有IC的高度敏感的杂合细胞系₅₀PLX4032的值低于1μM，纯合细胞系的敏感性通过PLX4022浓度的单对数差异传播（表1). 然后，我们使用基于质谱的基因分型对500多个基因突变进行高通量分析[11]和高密度SNP阵列，以探索其他基因组改变。两个不同的平台（Illumina和Affymetrix）给出了高度一致的结果（数据未显示），表明在10个细胞系中BRAF公司^V600E型突变，四个有扩增BRAF公司轨迹（表1). 这些扩增事件与BRAF公司^V600E型合子性或对PLX4032的敏感性。在这组细胞系中很少有二次突变，其中一个细胞系在表皮生长因子受体和一个突变的细胞系AKT公司（表1). 此外，M257细胞系是这两种细胞的野生型美国国家科学院和BRAF公司对PLX4032高度耐药，发现有3个野生型拷贝BRAF公司和一个点突变CDKN2A型.放大事件的分布MITF公司和表皮生长因子受体也在细胞系中传播。值得注意的是，关于PI3K/Akt途径的激活，没有基于激活突变或扩增的明确趋势AKT1/2型分离耐药和敏感细胞系。监督分层聚类比较PLX4032抗性和敏感性SNP阵列数据BRAF公司^V600E型突变细胞系没有指向具有一致改变的特定基因组区域，以区分两组细胞系。

敏感和耐药细胞系中MAPK和PI3k/Akt信号通路的调控

进一步探索细胞系如何与BRAF公司^V600E型突变对PLX4032的反应不同，我们选择了两个具有相似生长动力学的细胞系的极端例子来进行信号通路的扩展分析（图三). M229是两种最敏感的细胞系之一，而M233被证明具有很强的抗药性，尽管短在体外倍增时间（表1). PLX4032暴露于这两种细胞系中均导致pErk显著降低，但与耐药M233相比，敏感M229中的pErk更显著且更持久。M229具有杂合子PTEN公司通过SNP阵列分析进行缺失，并通过Western blot检测到PTEN蛋白的条带，该条带不随PLX4032暴露而改变。耐药M233细胞系具有纯合子PTEN公司缺失并且通过蛋白质印迹没有PTEN蛋白。这与M233而非M229中可检测到的基线pAkt有关，也与PLX4032暴露在耐药M233细胞系中而非敏感M229细胞系中后pAkt增加有关。有趣的是，PLX4032暴露后两种细胞系中的pS6均下降。最后，我们探讨了AMPK是否存在调节，AMPK最近被描述为葡萄糖代谢的下游调节剂BRAF公司^V600E型突变体[20]. pAMPK的诱导水平较低。这些研究表明，PLX4032对MAPK和PI3k/Akt信号通路具有复杂的影响，可能依赖于B-Raf以外的继发致癌事件。

图3

MAPK和PI3k/Akt途径中磷酸化关键蛋白和关键蛋白总量的Western blot分析a）将PLX4032敏感的M229细胞系和PLX4032-耐药的M233细胞系在不同浓度的PLX4022中培养24小时，并用Western blot分析裂解产物。b） 用PLX4032处理M229和M233细胞24小时以上，并用Western blot分析细胞裂解产物。

PLX4032抗肿瘤活性的非侵入性成像

我们分析了可用于PET扫描的三种不同代谢示踪剂的摄取情况：两种核苷类似物（胸腺嘧啶和FAC[21])和FDG，一种广泛用作PET示踪剂的葡萄糖类似物。正如预期，BRAF公司PLX4032暴露后，野生型细胞株对胸苷或FAC的摄取没有显著变化。相反，所有BRAF公司^V600E型突变的细胞系，无论其对PLX4032的敏感性如何，都显著降低了这两种核苷类似物的摄取（图4a类和4b个). PLX4032敏感和抗性之间的最大差异BRAF公司^V600E型突变体摄取FDG。PLX4032敏感型患者FDG摄取减少的百分比大约是PLX4032-敏感型患者的两倍BRAF公司^V600E型与PLX4032耐药细胞系相比的突变体（P=0.009，图4c类). 最后，我们测试了[¹⁸F] -FDG摄取可作为B-Raf的药效学标志物^V600E型PLX4032抑制体内小鼠皮下移植M249黑色素瘤，这是一种对PLX4032高度敏感的细胞系在体外经口灌胃给予PLX4032治疗3天，每日2次，然后使用microPET和microCT联合分析[¹⁸F] -FDG作为PET示踪剂。下降了32%[¹⁸F] -与溶媒对照小鼠相比，尽管在此早期肿瘤大小没有差异（图第4天). 总之，抑制[¹⁸F] -FDG摄取可作为有效B-Raf的早期标志物^V600E型PLX4032抑制。

图4

暴露于PLX4032后的代谢示踪剂摄取情况.a-c）在体外11种不同黑色素瘤细胞系的PET示踪剂摄取曲线。在微床阅读器上测量氚计数，并将PLX4032处理的细胞与载体对照进行比较，计算PET示踪剂的相对摄取量。a）[^三H] -胸苷摄取情况，b）[^三H] -FAC摄取曲线，c）[^三H] -FDG摄取曲线。黑线及其旁边的数字表示具有相同突变状态和对PLX4032敏感性的细胞系的PET示踪剂摄取的平均变化。d）[¹⁸F] FDG PET示踪剂摄取体内SCID/米色小鼠，左下腹5-7 mm M249黑色素瘤异种移植物，每日两次，给予100 mg/kg PLX4032或口服对照药物。三天后，给小鼠注射[¹⁸F] -FDG。

讨论

这个BRAF公司^V600E型突变是人类癌症中最常见的激酶域突变之一，在恶性黑色素瘤中发病率特别高[三,7]. Raf-inhibitors PLX4720和PLX4032具有临床前特征，可作为BRAF公司^V600E型突变激酶与野生型激酶相比具有良好的特性[9,22]. 了解具有不同致癌事件的黑色素瘤的敏感性和耐药性模式对临床翻译具有重要意义。我们的研究证实了PLX4032对BRAF公司^V600E型突变细胞系[22]. 令人惊讶的是，我们注意到对PLX4032的敏感性存在差异BRAF公司^V600E型对PLX4032细胞毒性作用具有抵抗力的突变体。在大多数情况下，这些细胞有生长动力学变慢的趋势，并且是杂合的BRAF公司^V600E型.

这种对PLX4032的差分响应BRAF公司^V600E型突变的黑色素瘤细胞株可能由几种机制解释。可能是在敏感细胞系中存在着优先的MAPK通路加性，而敏感性较低的细胞对BRAF公司^V600E型致癌信号，依赖于包括PI3K/Akt通路在内的其他信号通路的共同激活。我们通过SNP阵列和高通量癌基因测序探索了这一可能性，并特别关注这一途径。基因组分析显示，PI3K/Akt的改变，包括PTEN公司，的放大AKT公司和激活突变AKT公司分布在整个细胞株列表中，与PLX4032敏感性或耐药性没有明确的相关性。然而，在两个细胞系中，磷酸特异性Western blot染色表明，耐药细胞系在PLX4032暴露后增加了Akt信号。另一种可能性是PLX4032抗BRAF公司^V600E型突变体在Raf水平上具有选择性信号传导，正如对不同Raf-抑制剂AZ628获得性抗性的细胞株所描述的那样，这些突变体通过C-Raf增加信号传导[23]. The increase in pErk in an美国国家科学院正如Mek抑制剂所报道的那样，Q61L突变细胞系可以通过消除主要由双特异性磷酸酶（MKPs/DUSPs）介导的负反馈环来解释[17,24]以及最近关于C-Raf信号在与抑制的B-Raf异二聚时增加的描述BRAF公司野生型细胞[18,19]. 因此，在用Raf抑制剂治疗后，反馈回路的调节和Raf二聚体的改变也可能在对PLX4032的差异敏感性中起作用BRAF公司^V600E型突变细胞系。最后，促凋亡和抗凋亡分子如Bim和Bad的表达差异[25]可能会允许一些BRAF公司^V600E型突变细胞系在暴露于PLX4032时经历生长停滞但不死于凋亡。目前正在进行研究，以进一步探索这些可能性。

我们探讨了使用PET成像作为非侵入性检测PLX4032敏感性的手段。体外我们发现三种PET示踪剂FDG、FLT和FAC中的任何一种都可以用来区分黑色素瘤美国国家科学院或BRAF公司^V600E型基于PLX4032对细胞周期和代谢的差异效应的突变。FDG还可用于区分BRAF公司^V600E型突变型黑色素瘤对PLX4032的敏感性高或低。PI3K/Akt途径被广泛认为通过mTOR在调节葡萄糖代谢中起作用，但最近发现LKB1-AMPK途径受致癌物的调节BRAF公司^V600E型信号[20]这可能解释了PLX4032抑制FDG摄取的显著快速作用。我们在两个细胞系中探索了这种可能性。我们的数据表明，PLX4032暴露后pAMPK略有增加，这可能与提出的假设一致[20].

结论

这些对黑色素瘤细胞系的研究可能有助于更好地解释最近报道的PLX4032 I期临床试验的结果[26]，超过70%的患者有客观反应BRAF公司^V600E型转移性黑色素瘤阳性。PLX4032敏感和抗性的表征BRAF公司^V600E型突变的黑色素瘤细胞株可能提供了有关决定对PLX4032敏感性和耐药性的分子机制的信息。此外，分子成像[¹⁸F] FDG PET扫描可能有助于提供PLX4032的完整或不完整药效作用的早期读数，从而预测可能对治疗有反应或可能对治疗没有反应的病变。